烏梅丸對(duì)潰瘍性結(jié)腸炎大鼠免疫調(diào)控作用機(jī)制的研究.pdf

1、目的：潰瘍性結(jié)腸炎(UC)是一種病因尚未完全闡明的慢性炎癥性腸病。主要臨床表現(xiàn)為持續(xù)或反復(fù)發(fā)作的腹痛、粘液膿血便、腹瀉和里急后重。由于目前該病發(fā)病率逐年增加，發(fā)病機(jī)制尚未完全闡明，又缺乏有效的治療藥物，故尋找有效的防治藥物也一直是研究的熱點(diǎn)。中醫(yī)藥治療該病有悠久的歷史和豐富的經(jīng)驗(yàn)，大量的臨床實(shí)踐證明，烏梅丸治療UC療效顯著，副作用小。本課題通過(guò)建立UC大鼠模型來(lái)研究烏梅丸對(duì)UC的治療作用及機(jī)制，特別是通過(guò)觀察其對(duì)UC大鼠細(xì)胞因子(IL-

2、8、IL-1 3)及粘附分子(CD44、CD54)、κ基因結(jié)合核因子(NF-κB)、信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)和轉(zhuǎn)錄激活因子6(STAT6)的影響，深入揭示烏梅丸治療UC的作用機(jī)制，為中醫(yī)藥治療UC提供一定的實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)和理論依據(jù)。 方法：將健康SD大鼠84只(雌雄各半)按雌雄隨機(jī)分為6組，分別為正常對(duì)照組、模型組、柳氮磺胺吡啶組、烏梅丸大、中、小劑量組，每組14只。除正常對(duì)照組外，其余5個(gè)組均采用免疫加局部刺激(2，4-二硝基氯苯加醋酸)復(fù)合法，復(fù)

3、制UC大鼠模型。模型成功后，分別觀察蒸餾水、SASP、烏梅丸大、中、小劑量治療UC大鼠后的一般狀況、結(jié)腸病理改變及超微病理結(jié)構(gòu)的變化；用雙抗夾心ELISA法檢測(cè)UC大鼠病變結(jié)腸粘膜IL-8、IL-13含量的變化，用鏈霉菌抗生物素一過(guò)氧化酶法(SP法)檢測(cè)病變結(jié)腸粘膜免疫指標(biāo)NF-κB、CD44、CD54、IL-8的光密度的變化；用逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈法(RT-PCR法)檢測(cè)病變結(jié)腸粘膜STAT6mRNA的表達(dá)的變化。 結(jié)果：

4、(1)實(shí)驗(yàn)1結(jié)果表明：模型組UC大鼠與正常對(duì)照組比較體重明顯減輕(P<0.01)，結(jié)腸組織損傷評(píng)分明顯比正常對(duì)照組高(P<0.01)，模型組結(jié)腸組織細(xì)胞因子IL-8的表達(dá)明顯升高，IL-13的表達(dá)明顯降低，與正常組比較均有非常顯著性差異(P<0.01)。 (2)實(shí)驗(yàn)2結(jié)果表明：模型組UC大鼠從癥狀上可見(jiàn)粘液稀便、甚至血便、消瘦、懶動(dòng)、皮毛無(wú)光澤、食欲減退、體重減輕(與正常對(duì)照組比較，P<0.01)。模型組結(jié)腸組織損傷評(píng)分明顯比正

5、常對(duì)照組高(P<0.01)，經(jīng)過(guò)烏梅丸及SASP治療后，烏梅丸各組及SASP組結(jié)腸組織損傷評(píng)分均有不同程度降低。在結(jié)腸粘膜上皮缺損情況、腺體排列是否規(guī)則、粘膜充血狀況、炎細(xì)胞浸潤(rùn)等方面，各組病理改變及電鏡下超微結(jié)構(gòu)均有明顯的差異。 (3)實(shí)驗(yàn)3結(jié)果表明：模型組UC大鼠的組織中促炎細(xì)胞因子IL-8的含量高于正常對(duì)照組(P<0.01)，抗炎細(xì)胞因子IL-13含量低于正常組(P<0.01)；烏梅丸大、中、小劑量組、SASP組IL-8含

6、量均低于模型組(P<0.01或P<0.05)，IL-13含量均高于模型組(P<0.01或P<0.05)；烏梅丸大劑量組IL-8、IL-13的含量分別與SASP組比較，均有顯著性差異(P<0.05)。 (4)實(shí)驗(yàn)4結(jié)果表明：模型組UC大鼠結(jié)腸組織中CD44、CD54的光密度均高于正常對(duì)照組(P<0.01)。經(jīng)治療后，烏梅丸大、中、小劑量組及SASP組均能降低CD44、CD54的光密度，與模型組相比，有非常顯著性差異(P<0.01)

7、，烏梅丸大劑量組CD44、CD54的光密度均高于SASP組(P<0.01)。 (5)實(shí)驗(yàn)5結(jié)果表明：模型組uC大鼠結(jié)腸組織NF-kB的光密度高于正常對(duì)照組(P<0.01)。烏梅丸大、中、小劑量組及SASP組均能降低NF-kB的光密度，與模型組相比，有顯著性差異(P<0.01)，烏梅丸大劑量組NF-kB的光密度高于SASP組(P<0.01)。 (6)實(shí)驗(yàn)6結(jié)果表明：模型組UC大鼠結(jié)腸組織STAT6mRNA的表達(dá)低于正常對(duì)照

8、組，經(jīng)烏梅丸和SASP治療后，STAT6mRNA的表達(dá)升高，烏梅丸大、中、小劑量組及SASP組與模型組比較均有非常顯著性差異(P<0.01)。 結(jié)論：模型復(fù)制成功。烏梅丸對(duì)UC大鼠的治療是有效的，其中中藥組存在量效關(guān)系，烏梅丸大劑量組療效優(yōu)于SASP組。細(xì)胞因子IL-8、IL-13均參與uc形成。烏梅丸通過(guò)上調(diào)IL-13、下調(diào)IL-8，從而恢復(fù)細(xì)胞因子的失衡，達(dá)到調(diào)節(jié)免疫反應(yīng)的目的。黏附因子CD44、CD54均參與uc的形成，烏