芪仙安腸方對大鼠潰瘍性結(jié)腸炎免疫機制的實驗研究.pdf

1、目的：潰瘍性結(jié)腸炎(UC)是以脾虛為本，濕熱邪毒為標(biāo)，瘀血阻絡(luò)貫穿始終為病機關(guān)鍵。芪仙安腸方是導(dǎo)師在臨床上治療UC的經(jīng)驗方，在治療上以“益氣健脾，清熱利濕，化瘀解毒，生肌斂瘡”為治療大法取得較好效果。故本研究通過動物實驗，進(jìn)一步觀察芪仙安腸方治療UC大鼠的療效以及探討本方對實驗大鼠免疫機制的影響。 方法：本研究采用三硝基苯磺酸(TNBS)/乙醇聯(lián)合造模法誘導(dǎo)大鼠潰瘍性結(jié)腸炎動物模型(MK)，于造模后第3天分別給予芪仙安腸方大(D

2、K)、中(ZK)、小劑量(XK)和柳氮磺胺吡啶(LK)進(jìn)行灌胃治療，觀察其療效以及探討其作用機制。實驗分三個方面研究探討：實驗一觀察芪仙安腸方對潰瘍性結(jié)腸炎大鼠一般狀態(tài)、結(jié)腸組織病理形態(tài)學(xué)及紅細(xì)胞免疫的影響；實驗二芪仙安腸方對潰瘍性結(jié)腸炎大鼠T淋巴細(xì)胞亞群及免疫球蛋白的影響；實驗三芪仙安腸方對潰瘍性結(jié)腸炎大鼠ICAM-1表達(dá)的影響。通過動物實驗進(jìn)一步探討本方治療潰瘍性結(jié)腸炎的可能作用機制。 結(jié)果： 1.實驗一 1

3、.1一般狀況(DAI)與MK(2.016±0.401)比較，DK(0.429±0.153)、ZK(0.496±0.144)、XK(1.304±0.212)、LK(1.286±0.299)、BK(0.378±0.133)都能明顯的降低大鼠的疾病活動指數(shù)；其中中藥組與LK之間比較，DK、ZK明顯低于LK(PDK-LK<0.01)(PZK-LK<0.01)；三種不同劑量中藥之間比較，DK、ZK明顯低于XK(PDK-XK<0.01)(PZK-X

4、K<0.01)。 1.2結(jié)腸病理組織觀察MK大鼠腸黏膜層完整，可見充血水腫和炎細(xì)胞浸潤；LK和三個中藥組黏膜層完整，未見充血、水腫及炎細(xì)胞浸潤。 1.3紅細(xì)胞免疫紅細(xì)胞C3b受體酵母菌花環(huán)(RBC-C3bR)：與MK(4.50±1.75)比較，DK(8.5±1.58)、ZK(8.31±1.75)、BK(9.31±2.09)能非常顯著增高血中紅細(xì)胞C3bR 受體酵母菌花環(huán)；其中中藥與LK(6.49±2.41)比較，DK優(yōu)于

5、LK(PDK-LK<0.05)；三種不同劑量的中藥之間比較，DK與XK(6.46±2.18)比較能顯著提高血中紅細(xì)胞C3b受體酵母菌花環(huán)(PDK-XK<0.05)。 紅細(xì)胞免疫復(fù)合物花環(huán)試驗(RBC-ICR)：與MK(2.625±0.916)比較，DK(0.875±0.732)、ZK(0.938±0.729)、BK(0.813±0.651)能明顯降低紅細(xì)胞免疫復(fù)合物花環(huán)；其中中藥與LK(1.846±0.620)之間比較，DK、Z

6、K明顯低于LK(PDK-LK<0.05)(PZK-LK<0.05)；三種不同劑量的中藥之間的比較，DK、ZK與XK(1.825±0.667)比較能明顯降低紅細(xì)胞免疫復(fù)合物花環(huán)(PDK-XK<0.05)(PZK-XK<0.05)。 2.實驗二 2.1T淋巴細(xì)胞亞群(％)CD3：與MK(65.98±2.54)比較，DK(52.48±4.35)、ZK(53.52±3.73)、BK(48.98±3.48)均能明顯降低血中CD3含

7、量；其中中藥與LK(61.09±1.42)之間比較，DK、ZK血中CD3的含量能明顯低于LK(PDK-LK<0.01)(PZK-LK<0.01)；三種不同劑量的中藥之間比較，DK、ZK明顯低于XK(61.33±8.53)(PDK-XK<0.01)(PZK-XK<0.01)。 CD4：與MK(51.03±3.37)比較，DK(25.24±4.40)、ZK(26.49±3.07)、XK(39.97±4.48)、LK(40.36±4.

8、63)、BK(25.18±4.42)均能明顯降低血中CD4的含量；其中中藥組與LK之間比較，DK、ZK與LK比較能明顯降低血中CD4的含量(PDK-LK<0.01)(PZK-LK<0.01)；三種不同劑量的中藥之間的比較，DK、ZK明顯低于XK(PDK-XK<0.01)(PZK-XK<0.01)。 CD8：與MK(14.69±3.45)比較，DK(27.80±7.29)、ZK(27.78±6.96)、BK(27.65±6.80)

9、能明顯升高血中CD8含量；其中中藥與LK(21.22±6.27)之間比較，DK、ZK與LK比較具有顯著性差異(PDK-LK<0.01)(PZK-LK<0.01)；三種不同劑量的中藥之間比較，DK、ZK與XK(21.28±6.34)比較具有顯著性差異(PDK-XK<0.05)(PZK-XK<0.05)。 CD4/CD8：與MK(3.469±0.224)比較，DK(1008±0.254)、ZK(1.034±0.245)、XK(1.8

10、69±0.043)、LK(1.868±0.129)、BK(0.991±0.191)均能明顯降低血中CD4/CD8的含量(P<0.01)；其中中藥與LK比較，DK、ZK明顯低于LK(PDK-LK<0.01)(PZX-XK<0.01)；三種不同劑量的中藥之間比較，DK、ZK明顯低于XK(PDK-XK<0.01)(PZK-XK<0.01)。 2.2免疫球蛋白IgA：與MK(0.088±0.024)比較，DK(0.036±0.017)、

11、ZK(0.041±0.019)、BK(0.035±0.022)均能明顯降低血中IgA的含量(P<0.01)；其中中藥與LK比較，DK、ZK明顯低于LK(0.063±0.026)(PDK-LK<0.05)(PZK-LK<0.05)；三種不同劑量的中藥之間比較，DK、ZK與XK(0.064±0.025)比較能明降低血中IgA的含量(PDK-XK<0.05)(PZK-XK<0.05)。 IgG：與MK(0.169±0.082)比較，D

12、K(0.204±0.068)、ZK(0.210±0.085)、BK(0.169+0.082)均能降低血中IgG的含量；其中中藥組與LK(0.300±0.105)比較，DK、ZK明顯低于LK(PDK-LK<0.05)(PZK-LK<0.05)；三種不同劑量的中藥之間比較，DK、ZK與XK(0.300±0.100)比較能明顯降低血中IgG的含量(PDK-XK<0.05)(PZK-XK<0.05)。 IgM：與MK(0.309±0.0

13、70)比較，BK(0.195±0.066)能明顯降低血中的IgM；其余各組之間比較，DK(0.271±0.056)、ZK(0.272±0.050)、XK(0.297±0.041)、LK(0.300±0.050)之間無顯著性差異。 2.3補體C3、C4C3：與MK(0.130±0.037)比較，DK(0.209±0.038)、ZK(0.206±0.018)、BK(0.216+0.036)均能明顯升高血中的補體C3的含量；其中中藥組

14、與LK(0.171±0.030)之間比較，DK、ZK能明顯高于LK(PDK-LK<0.05)(PZK-LK<0.05)；三種不同劑量的中藥組之間比較，DK、ZK與XK(0.169±0.030)之間比較能明顯升高血中的補體C3的含量(PDK-XK<0.05)(PZK-XK<0.05)。 C4：與MK(0.024±0.011)比較，DK(0.058±0.016)、ZK(0.050±0.011)、BK(0.059±0.019)均能升高

15、血中補體C4；其中中藥組與LK(0.040±0.016)之間比較，DK明顯高于LK(PDK-LK<0.05)；三種不同劑量的中藥之間比較，DK與XK(0.040±0.019)比較能明顯升高血中補體C4含量(PDK-XK<0.05)。 3 實驗三：免疫組織化學(xué)染色黏附分子ICAM-1檢測與MK(5.750±1.282)比較，DK(1.875±0.991)、ZK(2.125±0.991)、XK(2.625±0.916)、LK(2.750±1

16、.165)、BK(1.125±0.991)均能明顯降低腸黏膜陽性細(xì)胞的表達(dá)；其余各組之間比較無顯著性差異。 結(jié)論： 芪仙安腸方能明顯改善UC大鼠一般狀況和結(jié)腸組織形態(tài)；提高補體C3、C4含量，減少了血液中IgG、IgA免疫反應(yīng)，從而降低了ICAM-1對腸黏膜的炎癥反應(yīng)，IgM治療前后變化不明顯；本方還能增強UC大鼠血清中紅細(xì)胞C3bR的活性，減少紅細(xì)胞免疫復(fù)合物(RCIC)在腸黏膜的大量沉積，從而減輕了其對結(jié)腸黏膜上皮細(xì)