長(zhǎng)春新堿對(duì)大鼠小腸肌電及動(dòng)力影響機(jī)制的研究.pdf

1、長(zhǎng)春新堿(Vincristine,VCR)是夾竹桃科植物長(zhǎng)春花中提出的二吲哚類化合物,為臨床常用抗腫瘤藥物,主要用于血液病、消化道等腫瘤的治療。VCR通過(guò)作用于細(xì)胞微管蛋白而干擾腫瘤細(xì)胞代謝。胃腸道動(dòng)力改變是其主要毒副作用之一,臨床表現(xiàn)多樣,以腹痛、便秘常見(jiàn),偶見(jiàn)麻痹性腸梗阻。目前VCR對(duì)胃腸道動(dòng)力影響的作用機(jī)制尚不明確。 慢波是胃腸運(yùn)動(dòng)的基本節(jié)律,Cajal間質(zhì)細(xì)胞(interstitial cells of Caial,IC

2、C)是慢波的起搏細(xì)胞,并參與神經(jīng)、肌肉之間的信息傳遞,調(diào)控胃腸道運(yùn)動(dòng)。ICC的數(shù)量及功能異常與多種胃腸運(yùn)動(dòng)障礙性疾病的發(fā)生有關(guān)。 腸神經(jīng)系統(tǒng)在胃腸道形成廣泛神經(jīng)網(wǎng)絡(luò),調(diào)節(jié)胃腸道大部分生理及病理過(guò)程,并與中樞神經(jīng)系統(tǒng)及Cajal間質(zhì)細(xì)胞密切聯(lián)系。肌間神經(jīng)叢(Auerbach's plexus)：位于內(nèi)環(huán)肌與外縱肌之間,主要協(xié)調(diào)平滑肌運(yùn)動(dòng)。 5-羥色胺(Serotonin,5-HT)為單胺類神經(jīng)遞質(zhì),具有多種生物學(xué)功能。5-

3、HT及其受體廣泛存在于中樞神經(jīng)系統(tǒng)、周?chē)窠?jīng)系統(tǒng)和胃腸道,參與神經(jīng)、胃腸道功能的調(diào)節(jié)。除胃腸道平滑肌外,其受體還存在于壁細(xì)胞、腸粘膜上皮細(xì)胞、腸肌間神經(jīng)叢和EC上,少數(shù)分布于ICC上。5-HT受體與胃腸道功能密切相關(guān)的是5-HT1、5-HT2、5-HT3、5-HL4、5-HT7受體。莫沙必利為苯丙酰胺類衍生物,作為5-HT4受體激動(dòng)劑可促進(jìn)胃腸運(yùn)動(dòng),在臨床廣泛應(yīng)用于胃腸動(dòng)力障礙的治療。 本實(shí)驗(yàn)利用小腸在體電極埋置模型,通過(guò)研究V

4、CR對(duì)清醒大鼠小腸肌電和動(dòng)力的作用；VCR對(duì)小腸ICC和腸肌間神經(jīng)元的作用；莫沙必利對(duì)VCR引起的小腸動(dòng)力障礙的治療效果,進(jìn)一步探討VCR對(duì)小腸肌電和動(dòng)力的作用機(jī)制以及相關(guān)治療。 第一部分：長(zhǎng)春新堿對(duì)大鼠小腸肌電和動(dòng)力作用的研究 目的:探討長(zhǎng)春新堿對(duì)清醒大鼠小腸肌電和動(dòng)力的影響,以闡明長(zhǎng)春新堿對(duì)小腸動(dòng)力的作用方式。 方法:SD大鼠24只,隨機(jī)分為4組：0.9％氯化鈉對(duì)照組；VCR0.25mg/kg組；VCR0.5

5、mg/kg組；VCR 0.75mg/kg組；尾靜脈注射藥物。通過(guò)小腸在體電極埋置模型,采用生物機(jī)能實(shí)驗(yàn)系統(tǒng)記錄基礎(chǔ)值、用藥當(dāng)日、用藥后第3日小腸慢波的頻率、曲線下面積,MMC周期、MMCⅢ相持續(xù)時(shí)間；通過(guò)碳素墨汁灌胃測(cè)定VCR用藥后第3日的小腸推進(jìn)率。 結(jié)果:長(zhǎng)春新堿0.25mg/kg組對(duì)小腸肌電無(wú)明顯改變。VCR 0.5mg/kg,0.75mg/kg組均出現(xiàn)小腸肌電活動(dòng)異常,隨作用時(shí)間不同表現(xiàn)不同。靜注(51±14.27)mi

6、n 后MMC模式被連續(xù)性峰電取代,(78.33±13.08)min后MMC逐漸恢復(fù),周期縮短,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F=28.078,P<0.01)。用藥后第3日,VCR 0.5mg/kg,0.75mg/kg每組6只大鼠中各4只小腸MMC模式被打斷,代之以不規(guī)則的峰電活動(dòng)。慢波形態(tài)紊亂,兩組曲線下面積分別為(2.43±0.65)mv·s和(2.49±0.64)mv·s較對(duì)照組(3.83±0.57)mv.s降低(F=9.764,P<0.01)

7、。VCR 0.75mg/kg組的小腸推進(jìn)率(3 3.59±1.43)％較對(duì)照組(60.34±2.41)％減慢(t=23.36,P<0.01)。 結(jié)論:長(zhǎng)春新堿引起大鼠小腸肌電和動(dòng)力的改變,并與作用時(shí)期相關(guān),早期小腸肌電活動(dòng)增強(qiáng),后期小腸肌電及動(dòng)力減弱。 第二部分：長(zhǎng)春新堿對(duì)大鼠小腸Cajal間質(zhì)細(xì)胞及腸肌間神經(jīng)元作用的研究 目的:探討長(zhǎng)春新堿對(duì)大鼠小腸Ca-ial間質(zhì)細(xì)胞及腸肌間神經(jīng)元的作用,以闡明長(zhǎng)春新堿引起小

8、腸動(dòng)力變化的機(jī)制。 方法: SD大鼠12只,隨機(jī)分為2組：對(duì)照組；VCR0.75mg/kg組,尾靜脈注射藥物。VCR用藥后第3日,行心臟灌注、小腸組織整裝鋪片,通過(guò)免疫熒光染色觀察小腸Cajal間質(zhì)細(xì)胞及腸肌間神經(jīng)元的陽(yáng)性面積比、平均光密度、累積光密度(IOD),行半定量分析。 結(jié)果: VCR組ICC陽(yáng)性面積比(5.84±3.11)％較對(duì)照組(24.90±1.86)％減少(t=20.357,P<0.01),IOD(240

9、0504.4±1325052.7)較對(duì)照組(6780957.9±1683911.3)減少(t=7.918,P<0.01)。腸肌間神經(jīng)元陽(yáng)性面積比(14.37±2.00)％和IOD(3062216.6±708334.2)與對(duì)照組差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。 結(jié)論: VCR用藥后第3日小腸ICC表達(dá)下降,腸肌間神經(jīng)元無(wú)明顯變化。推測(cè)ICC的損傷為VCR后期小腸動(dòng)力障礙的主要原因。 第三部分：長(zhǎng)春新堿對(duì)大鼠小腸Cajal

10、間質(zhì)細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)的影響 目的:觀察長(zhǎng)春新堿對(duì)大鼠小腸Ca-ial間質(zhì)細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)的影響,以進(jìn)一步闡明長(zhǎng)春新堿對(duì)小腸動(dòng)力影響的機(jī)制。 方法: SD大鼠12只,隨機(jī)分為2組：對(duì)照組；VCR0.75mg/kg組,尾靜脈注射藥物。VCR用藥后第3日處死大鼠,取新鮮部分小腸組織,行透射電鏡檢查。 結(jié)果: VCR用藥組大鼠小腸Ca.jal間質(zhì)細(xì)胞正常超微結(jié)構(gòu)破壞,表現(xiàn)為細(xì)胞突起明顯減少或消失.許多末梢突起破裂,失去胞漿內(nèi)容物

11、。細(xì)胞核皺縮,異染色質(zhì)趨邊,呈斑塊狀。胞漿內(nèi)細(xì)胞器數(shù)量明顯減少,結(jié)構(gòu)出現(xiàn)異常。 結(jié)論: VCR用藥后第3日小腸Cajal間質(zhì)細(xì)胞受損。推測(cè)Cajal間質(zhì)細(xì)胞的損傷為VCR后期小腸動(dòng)力障礙的主要原因。 第四部分：莫沙必利對(duì)長(zhǎng)春新堿引起的大鼠小腸動(dòng)力障礙作用的研究 目的:探討5-羥色胺4受體激動(dòng)劑莫沙必利對(duì)長(zhǎng)春新堿引起的大鼠小腸動(dòng)力障礙的影響,進(jìn)一步為臨床改善VCR所致消化道副作用提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。 方法: SD

12、大鼠12只,隨機(jī)分為2組:VCR+0.9％氯化鈉灌胃組；VCR+莫沙必利灌胃組,尾靜脈注射VCR0.75mg/kg后第1日開(kāi)始行莫沙必利1.5mg/kg灌胃,連續(xù)3日。通過(guò)小腸在體電極埋置模型,采用生物機(jī)能實(shí)驗(yàn)系統(tǒng)記錄基礎(chǔ)值、VCR用藥當(dāng)日、VCR用藥后第3日小腸慢波的頻率、曲線下面積,MMC周期、MMCⅢ相持續(xù)時(shí)間;通過(guò)碳素墨汁灌胃測(cè)定VCR用藥后第3日的小腸推進(jìn)率。 結(jié)果: VCR用藥后第3日,莫沙必利組6只大鼠中有2只,生