抗癌復(fù)方硫酸長(zhǎng)春新堿脂質(zhì)體給藥系統(tǒng)研究.pdf

1、“癌癥”是臨床上的一種常見病，亦是對(duì)患者生命安全威脅最大的一種惡性疾病。目前，雖然有了手術(shù)療法、放射療法、化學(xué)療法、生物醫(yī)學(xué)療法等治療手段，但癌癥的防治遠(yuǎn)遠(yuǎn)不能達(dá)到人類健康的要求，早日攻克癌癥亦是當(dāng)今人類的一種迫切希望。為了攻克癌癥，醫(yī)藥工作者進(jìn)行著不懈的努力，不斷提出新的治療理論和治療方法，早期化療通常只用一種抗癌藥物，但易產(chǎn)生耐藥性，且治療效果不好，目前臨床化療多采用聯(lián)合化療，即兩種抗癌藥物甚至多種抗癌藥物聯(lián)合使用，聯(lián)合化療與僅使用

2、單一抗癌藥物相比，有以下幾個(gè)特點(diǎn)：可增加對(duì)癌細(xì)胞的細(xì)胞毒性；攻擊癌細(xì)胞的不同生物化學(xué)靶點(diǎn)；具有不同的抗癌作用機(jī)理，產(chǎn)生加和(或)協(xié)同作用；可同時(shí)作用于不同生長(zhǎng)周期的癌細(xì)胞；克服癌細(xì)胞的耐藥性；聯(lián)合化療對(duì)正常細(xì)胞的毒性不產(chǎn)生疊加毒性。因此，臨床廣泛采用聯(lián)合化療治療癌癥。 鹽酸米托蒽醌(MTO)、硫酸長(zhǎng)春新堿(VCR)是臨床常用的兩種化療藥物，聯(lián)合使用產(chǎn)生加和協(xié)同的抗癌作用，是臨床治療晚期乳腺癌，急性淋巴性白血病、非何杰金淋巴瘤、骨

3、髓瘤的常用聯(lián)合化療方案，療效顯著。 木課題首次提出將兩種抗癌藥物MTO和VCR同時(shí)包結(jié)于脂質(zhì)體納米粒給藥載體的構(gòu)想，利用脂質(zhì)體納米粒給藥系統(tǒng)的獨(dú)特優(yōu)勢(shì)，用于癌癥治療。 為研究藥物的包封率、泄露率、體外釋藥速率奠定基礎(chǔ)，建立了同時(shí)定量測(cè)定兩種藥物濃度的HPLC法，方法準(zhǔn)確、新穎、簡(jiǎn)便、重現(xiàn)性好。 根據(jù)MTO和VCR的理化性質(zhì)，以注射用大豆卵磷脂為材料，以體外釋藥半衰期(T1/2)和泄露率為指標(biāo)，確定MTO-VCR-

4、LP的制備工藝，分別以一級(jí)動(dòng)力學(xué)方程、Higuchi方程、Weibull方程對(duì)MTO-VCR-LP-1、MTO-VCR-LP-2以及對(duì)照MTO和VCR水溶液(MTO-VCR-Soln)中VCR體外釋藥數(shù)據(jù)進(jìn)行擬合，MTO-VCR-LP-1中VCR的釋藥曲線以Weibull方程擬合效果最好，T1/2為6.82h，MTO-VCR-LP-2中VCR的釋藥曲線以Higuchi方程擬合效果最好，T1/2為2.22h，MTO-VCR-Soln中VC

5、R的釋藥曲線以Higuchi方程擬合效果最好，T1/2為1.70h。泄露實(shí)驗(yàn)結(jié)果為MTO-VCR-LP-1中MTO在51d內(nèi)幾乎無(wú)泄露；VCR在11d內(nèi)幾乎無(wú)泄露，但在33d時(shí)滲漏率達(dá)28.85％，在51d時(shí)滲漏率達(dá)79.82％；MTO-VCR-LP-2中MTO在5d時(shí)滲漏率為11.88％，VCR在5d時(shí)滲漏率達(dá)95.35％。根據(jù)體外釋藥半衰期(T1/2)和泄露率結(jié)果，確定了復(fù)方硫酸長(zhǎng)春新堿脂質(zhì)體(MTO-VCR-LP-1)的制備工藝。

6、采用逆向蒸發(fā)法合并pH梯度法制備MTO-VCR-LP，MTO-VCR-LP的平均粒徑為76.61nm，Z-電位為-30.97mv，經(jīng)SephadexG-50葡聚糖凝膠柱分離，HPLC法測(cè)定MTO的平均包封率達(dá)99.53％±0.34％(n=3)，載藥量為2.5％±0.10％(n=3)；VCR的平均包封率達(dá)95.77％±2.70％(n=3)，載藥量為0.38％±0.05％(n=3)。由于MTO-VCR-LP在33d時(shí)滲漏率達(dá)28.85％，在

7、51d時(shí)滲漏率達(dá)79.82％，故將其進(jìn)行冷凍干燥，篩選出適宜的凍干劑為15％的蔗糖，所制備的MTO-VCR-LP凍干均勻、疏松，具有良好的再分散性。 為測(cè)定體內(nèi)生物樣品中MTO和VCR的濃度，采用同一流動(dòng)相，在不同波長(zhǎng)處，HPLC法分別測(cè)定體內(nèi)生物樣品中MTO和VCR的濃度，方法準(zhǔn)確、新穎、簡(jiǎn)便、重現(xiàn)性好。 為了考察MTO-VCR-LP的體內(nèi)分布特性，進(jìn)行了小鼠尾靜脈注射MTO-VCR-LP和MTO-VCR-Soln的體

8、內(nèi)分布實(shí)驗(yàn)研究，從動(dòng)力學(xué)參數(shù)可以看出，血漿中MTO-VCR-LP中MTO的AUC是MTO-VCR-Soln的40.62倍，t1/2B是MTO原藥的432倍；心、肝、脾、肺、腎中MTO-VCR-LP中MTO的AUC分別是MTO-VCR-Soln中的0.72、2.73、1.79、0.48、0.47倍；血漿中MTO-VCR-LP中VCR的AUC是MTO-VCR-Soln中2.78倍，t1/2(Ke)是VCR原藥的1.14倍，心、肝、脾、肺、腎

9、中MTO-VCR-LP中MTO的AUC分別是MTO-VCR-Soln中的0.57、0.87、0.66、0.47和0.67倍。結(jié)果證實(shí)MTO-VCR-LP可改善原藥的體內(nèi)分布特性。 為了考察MTO-VCR-LP是否可降低原藥的毒副作用，測(cè)定了MTO-VCR-LP和MTO-VCR-Soln的小鼠半數(shù)致死量(LD50)。MTO-VCR-LP的LD50為4.2mg·kg-1(95％可信限為2.9235～5.9428)。游離藥物的LD50

10、為2.7mg·kg-1(95％可信限為0.9798～7.4398)。初步證實(shí)MTO-VCR-LP降低了原藥的毒副作用。 為了進(jìn)一步考察MTO-VCR-LP對(duì)荷人乳腺癌MCF-7裸鼠腫瘤的抑瘤效果和對(duì)用藥裸鼠的毒理作用，進(jìn)行荷瘤裸鼠抑瘤率的測(cè)定，同時(shí)進(jìn)行了毒理學(xué)研究。藥效學(xué)實(shí)驗(yàn)中，在Blab/c裸鼠的頸背部皮下接種人乳腺癌MCF-7細(xì)胞，尾靜脈分別注入MTO-VCR-LP、MTO-VCR-Soln、MTO脂質(zhì)體(MTO-LP)、M

11、TO溶液(MTO-Soln)、VCR脂質(zhì)體(VCR-LP)、VCR溶液(VCR-Soln)和生理鹽水。MTO-VCR-LP、MTO-VCR-Soln、MTO-LP、MTO-Soln、VCR-LP、VCR-Soln組的抑瘤率分別為67.13％、67.75％、38.26％、42.16％、49.48％和34.74％。證實(shí)兩藥同時(shí)使用抗癌效果優(yōu)于單一藥物。在毒理學(xué)研究中，觀察了藥物對(duì)給藥局部的刺激性，進(jìn)行常規(guī)脊髓計(jì)數(shù)等研究，實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)給予游離藥

12、物組(MTO-VCR-Soln、MTO-Soln和VCR-Soln)的裸鼠尾部潰爛，而給予脂質(zhì)體組(MTO-VCR-LP、MTO-LP、和VCR-LP)裸鼠尾部基本完好，證實(shí)脂質(zhì)體作為藥物載體可減少藥物對(duì)給藥局部的刺激和損傷。MTO的副作用主要有骨髓抑制，引起白細(xì)胞和血小板減少，此為劑量限制性毒性。VCR的副作用主要有神經(jīng)系統(tǒng)毒性和骨髓抑制，MTO和VCR的副作用均有骨髓抑制，且有研究證實(shí)，粒徑小于100nm的納米粒具有骨髓靶向。因此，

13、進(jìn)行常規(guī)骨髓計(jì)數(shù)實(shí)驗(yàn)，每組隨即選取3裸鼠做常規(guī)骨髓計(jì)數(shù)測(cè)定，結(jié)果顯示，MTO-VCR-Soln組3張骨髓涂片有兩張未檢測(cè)到原始粒，說(shuō)明骨髓增生減低，且巨核細(xì)胞數(shù)分別為18個(gè)和5個(gè)，為所檢測(cè)21張涂片中最低，說(shuō)明此實(shí)驗(yàn)組裸鼠骨髓增生受抑制。其余6組的脊髓涂片，常規(guī)脊髓計(jì)數(shù)結(jié)果均表明骨髓增生極度活躍或明顯活躍，表明MTO-VCR-LP可降低游離藥物(MTO-VCR-Soln)對(duì)骨髓的抑制作用。按預(yù)定時(shí)間稱體重，繪制裸鼠體重變化曲線。注射脂質(zhì)

14、體組裸鼠體重的增加幅度高于相對(duì)應(yīng)的游離藥物組。說(shuō)明以平均體重為考察指標(biāo)，三種注射用脂質(zhì)體的毒性低于相對(duì)應(yīng)的游離藥物。 綜上所述，本課題在國(guó)際上首次提出將兩種抗癌藥物同時(shí)包結(jié)在脂質(zhì)體中的構(gòu)想，以體外釋藥速率作為指標(biāo)，確定了制備工藝，成功制備了高包封率，粒徑小的MTO-VCR-LP。建立了同時(shí)定量測(cè)定兩種藥物濃度的HPLC法以及體內(nèi)生物樣品測(cè)定的HPLC法。對(duì)比研究了MTO-VCR-LP與MTO-VCR-Soln體外釋藥規(guī)律，進(jìn)而研

15、究了小鼠體內(nèi)分布規(guī)律，測(cè)定了MTO-VCR-LP與MTO-VCR-Soln的LD50。在BALB/c-nu裸鼠上建立人乳腺癌MCF-7異位模型，進(jìn)行腫瘤生長(zhǎng)曲線和抑瘤率的測(cè)定等藥效學(xué)研究，進(jìn)行了骨髓常規(guī)計(jì)數(shù)實(shí)驗(yàn)，以探明藥物對(duì)骨髓的增生是否有抑制作用。結(jié)果證實(shí)MTO-VCR-LP可改善藥物的體內(nèi)分布，增強(qiáng)了藥物的抗癌效果，提高藥物在血液中的濃度、延長(zhǎng)藥物在血液中的循環(huán)時(shí)間，具有長(zhǎng)循環(huán)的特性，同時(shí)降低藥物在心、腎等內(nèi)臟器官的藥物濃度，降低了