抗惡性淋巴瘤中藥有效成分長春新堿透皮靶向給藥系統(tǒng)及其轉(zhuǎn)運機理的研究.pdf

1、長春新堿(ViNori8tine，VCR)是1962年由抗癌中藥長春花葉中提出的二聚吲哚類化合物，通過作用于腫瘤細(xì)胞徽管蛋白而干擾腫瘤細(xì)胞代謝，臨床應(yīng)用較為廣泛，主要用于治療急性淋巴細(xì)胞自血病、何杰金及非何杰金淋巴瘤，也用于乳腺癌、支氣管肺癌、軟組織肉瘤及神經(jīng)母細(xì)胞瘤等。VCR靜注后能迅速分布全身，神經(jīng)肌肉內(nèi)濃度較高，具有較大的神經(jīng)系統(tǒng)毒性；而持續(xù)靜脈滴注可避免高濃度帶來的毒性、延長有效濃度藥物在血中的停留時間，但病人順應(yīng)性較差。而透皮

2、給藥系統(tǒng)具有超越其它給藥途徑和方法的獨特優(yōu)點，如：藥物可不經(jīng)過肝臟的“首過效應(yīng)”和胃腸道影響；可用制劑技術(shù)控制藥物釋放，利用皮膚問層儲庫作用，使藥物濃度曲線平緩，避免“峰谷現(xiàn)象”。提供可預(yù)定的和較長的作用時間，維持穩(wěn)定持久的血藥濃度；內(nèi)病外治，使用方便，可隨時終止用藥，毒副作用小，具有“無針點滴”的美謄。在真皮層處，由于分子量在5000以上的大分子藥物的淋巴轉(zhuǎn)運性很強，若選擇適當(dāng)載體載帶VCR透過皮膚，剮可將VCR靶向輸送至淋巴。這使得

3、透皮給藥系統(tǒng)和靶向給藥系統(tǒng)有機地結(jié)合起來，在充分發(fā)揮透皮給藥系統(tǒng)“無針點滴”作用的同時，增加VCR在淋巴組織的聚集，降低其在全身臟器的分布，這將增加VCR的療效，降低其毒副作用。這種透皮靶向的學(xué)術(shù)思想具有一定的創(chuàng)新性，而采用透皮給藥的方法治療惡性腫瘤的研究還未見報道。 課題分別以去氧膽酸鈉(NaDC)、膽酸鈉(NaC)、十二烷基硫酸鈉(SDS)、TweenSO、Brij78單獨與大豆磷脂(soybean phospholipid,

4、SP)組成載體材料，采用干膜超聲法，制備了含不同表面活性劑的載VCR傳遞體(vincristineloaded transfersomes，VCR-T);同時，以分子量為200，000的殼聚糖(chitosan,cs)為載體材料，采用三聚磷酸鈉(TPP)膠凝法制備了載VCR殼聚糖納米粒(vincds~ne loaded chitoan-nanoparticles,VCR-CS-NPs)：通 過體外透皮試驗，篩選出VCR最佳的透皮

5、載體，以期達(dá)到高效載帶VCR穿透皮膚，并具備良好淋巴靶向性的目的。為此，課題系統(tǒng)研究了VCR最佳透皮給藥系統(tǒng)的制劑學(xué)性質(zhì)，大鼠體內(nèi)的組織分布、藥動學(xué)特征和靶向性，體內(nèi)轉(zhuǎn)運機理；并通過藥效試驗驗證其透皮淋巴靶向的效果。 以NaDC和SP為載體材料，粒徑和包封率為指標(biāo)，單因素試驗篩選出對VCR-T／NaDC制備影響較大的因素，正交試驗優(yōu)化制備工藝。在此最優(yōu)工藝的基礎(chǔ)上，篩選出NaC、SOS、TweenS0、Brij78等水溶性

6、表面活性劑可用于VCR-T的制備，并通過單因素試驗篩選出各自的最優(yōu)處方。最優(yōu)條件下制備的VCR-T／NaDC、VCR-T／NaC、VCR-T／SDS、VCR-T／Tween80、VCR-T／Brij78各自的粒徑分別為94、90、96、63、63nm，包封率分別為90％、92％、88％、53％、59％。 分別采用共價交聯(lián)和離子膠凝法制備CS-NPs，以TPP作為膠凝劑的離子膠凝法制得的納米粒粒徑較小，分布均勻。通過篩選分

7、散劑的種類、用量以及TPP的濃度，建立了CS-NPs的成型工藝。進(jìn)一步考察CS分子量、pH以及VCR濃度對VCR-CS-NPs包封率的影響，確立了VCR-CS-NPs的最優(yōu)處方。優(yōu)化條件下制得的VCR-CS-NPs粒徑180nm左右，包封率49％。 分別考察各VCR給藥系統(tǒng)對皮膚的刺激性、體外透皮速率及規(guī)律，篩選出VCR最佳透皮給藥系統(tǒng)。通過對皮膚的刺激性考察，發(fā)現(xiàn)含SOS的傳遞體對皮膚刺激性較大，能弓I起上皮細(xì)胞結(jié)構(gòu)改

8、變和角質(zhì)細(xì)胞的消失，而其它VCR給藥系統(tǒng)對皮膚無刺激。VCR-CS-NPs在12h內(nèi)累積透皮百分率為5.14％，但卻有20％的VCR滯留于皮內(nèi)，這是CS能有效打開細(xì)胞間緊密連接所起的作用，但制備的納米粒粒徑較大，且不具變形性，不能有效載帶VCR穿過皮膚。VCR-T／NaDC、VCR-T／NaC、VCR-T／SDS、VCR-T／Tween80、VCR-T／Brij78的12h累積透皮百分率分別為26.90％、35.70％、41.34％、3

9、5.00％、67.38[％]；除VCR-T／SDS的透皮過程符合Higuchi方程外，其余不同表面活性劑制備的VCT-T的透皮過程均符合多項式方程。VCR-T／SDS具有較好的透皮效果是由于對皮膚刺激性較大造成的。通過DSC分析，不同表面活性劑制備的VCR-T的透皮效果好壞和表面活性劑與磷脂膜之間的相互作用有關(guān)，空白SP的相轉(zhuǎn)變溫度(T<,t>)為37.58℃，Brij78的熔點為：38℃，兩者具有較強的相互作用力，使得sP的T<,t>

10、降低最為顯著，從而，VCR-T／Brij78具有最好的透皮效果。穩(wěn)定性考察發(fā)現(xiàn)，VCR-T／Brij78分別室溫放置10天，4℃放置6周是穩(wěn)定的。VCR-T／Brij7g可以作為VCR最佳透皮給藥系統(tǒng)進(jìn)行體內(nèi)研究和評價。這種選用BRIJ78為表面活性劑的傳遞體還未見報道。課題成功制備了VCR的不同給藥系統(tǒng)，證明了該給藥系統(tǒng)對VCR的增效減毒作用，達(dá)到了課題的預(yù)期目標(biāo)。該項目不僅在理論上可豐富透皮與靶向給藥系統(tǒng)的研究內(nèi)容，為中藥抗腫瘤成分