共載長(zhǎng)春新堿和神經(jīng)酰胺的脂質(zhì)體的抗肝癌作用研究.pdf

1、納米技術(shù)是化療領(lǐng)域的重大突破，也是當(dāng)前的研究熱點(diǎn)，針對(duì)納米載體的修飾克服普通化療藥物細(xì)胞毒性強(qiáng)和體內(nèi)循環(huán)時(shí)間短的缺點(diǎn)。長(zhǎng)春新堿是一種肝癌常用的化療藥物，它能夠抑制細(xì)胞自噬，損壞細(xì)胞的保護(hù)性自噬過(guò)程。Ceramide能夠引起線(xiàn)粒體性自噬，促進(jìn)功能障礙的線(xiàn)粒體通過(guò)自噬降解，兩者聯(lián)用可以使細(xì)胞自噬阻斷，使細(xì)胞死亡。
　　本研究在體外對(duì)兩種游離藥物對(duì)自噬蛋白的影響進(jìn)行了測(cè)定，發(fā)現(xiàn)VCR能夠抑制LC3和p62的表達(dá)，證明其抑制自噬過(guò)程的成熟

2、，而ceramide能夠使LC3表達(dá)增加，p62表達(dá)下降，說(shuō)明可以誘導(dǎo)自噬過(guò)程的發(fā)生。利用兩種藥物在體外的聯(lián)合殺傷實(shí)驗(yàn)結(jié)果，我們?cè)O(shè)計(jì)了脂質(zhì)體配方。然后，利用乙醇注入法和pH梯度法實(shí)現(xiàn)了長(zhǎng)春新堿和ceramide的共載，對(duì)制備的脂質(zhì)體進(jìn)行納米表征的測(cè)定，判斷脂質(zhì)體穩(wěn)定性。體外細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)納米藥物L(fēng)ip-VCR-Cer及Lip-VCR對(duì)肝癌細(xì)胞的殺傷效果較游離VCR和游離VCR+ceramide的效果而言要弱。而對(duì)于不同處理時(shí)間的細(xì)

3、胞存活率，不存在統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。與游離藥物不同，脂質(zhì)體通過(guò)細(xì)胞內(nèi)吞作用進(jìn)入細(xì)胞緩慢釋放發(fā)揮作用，到達(dá)腫瘤細(xì)胞的VCR和ceramide濃度增加，使藥物的利用率上升，增加對(duì)細(xì)胞的作用，而游離細(xì)胞對(duì)細(xì)胞的作用快速而短暫，細(xì)胞毒性作用迅速體現(xiàn)。
　　Lip-VCR-Cer的殺傷作用大于Lip-VCR，游離VCR+Ceramide的殺傷作用大于游離VCR，這可能與Ceramide對(duì)細(xì)胞發(fā)揮的作用有關(guān)，Ceramide在細(xì)胞內(nèi)能夠通過(guò)特定信號(hào)通

4、路誘導(dǎo)自噬，引起自噬蛋白LC3的表達(dá)增加，自噬流標(biāo)志蛋白p62表達(dá)降低，發(fā)揮誘導(dǎo)細(xì)胞自噬的保護(hù)性作用。Ceramide通過(guò)不同的機(jī)制誘導(dǎo)保護(hù)性自噬和致死性自噬，保護(hù)性自噬實(shí)質(zhì)為線(xiàn)粒體自噬。線(xiàn)粒體能夠通過(guò)某種自噬的形式選擇性降解功能受損的線(xiàn)粒體，避免功能異常的線(xiàn)粒體產(chǎn)生活性氧物質(zhì)增多，不利于細(xì)胞生長(zhǎng)，這種保護(hù)性自噬使腫瘤細(xì)胞能夠適應(yīng)內(nèi)外環(huán)境刺激，促進(jìn)腫瘤的生長(zhǎng)，而VCR的存在使其誘導(dǎo)的保護(hù)性作用抑制，使細(xì)胞不能適應(yīng)環(huán)境刺激，發(fā)生死亡。這種

5、自噬誘導(dǎo)劑的存在使腫瘤細(xì)胞對(duì)化療藥敏感性增強(qiáng)，使VCR與Ceramide聯(lián)用產(chǎn)生了更強(qiáng)的殺傷效果。
　　結(jié)論:Lip-VCR-Cer與Lip-VCR在基本表征，體外釋放和體外細(xì)胞毒性方面不存在統(tǒng)計(jì)學(xué)意義的差異。在體外殺傷效果弱于游離VCR和游離VCR+ceramide的細(xì)胞殺傷效果，四種藥物處理組的殺傷效果VCR+Ceramide＞VCR＞Lip-VCR-Cer＞Lip-VCR。VCR與Ceramide聯(lián)用增強(qiáng)了細(xì)胞殺傷效果，這可