PEG修飾的長(zhǎng)春瑞濱脂質(zhì)體的研究.pdf

1、目的:長(zhǎng)春瑞濱(vinorelbine,VRB)是由法國皮爾·法伯公司研發(fā)的半合成長(zhǎng)春堿類物質(zhì),為抗有絲分裂的細(xì)胞周期特異性藥物,本品為廣譜抗腫瘤藥物。長(zhǎng)春瑞濱用于轉(zhuǎn)移性乳腺癌、卵巢癌及非小細(xì)胞肺癌的治療。長(zhǎng)春瑞濱在使用中不良反應(yīng)較其他長(zhǎng)春堿類藥物略輕,但是在給藥過程中還是會(huì)有很多不良反應(yīng)。主要為骨髓抑制導(dǎo)致的紅細(xì)胞、白細(xì)胞、血小板減少,脫發(fā),手腳麻木等。
　　 脂質(zhì)體作為抗腫瘤藥物的載體,它可以減少藥物在正常組織的分布,增加藥

2、物在腫瘤組織的蓄積量,從而改善藥物的治療指數(shù)。傳統(tǒng)的脂質(zhì)體在體內(nèi)很容易被免疫系統(tǒng)識(shí)別和吞噬,因此脂質(zhì)體可能還沒有到達(dá)靶區(qū),就已經(jīng)被機(jī)體清除掉了而無法發(fā)揮其靶向作用。長(zhǎng)循環(huán)脂質(zhì)體又稱隱形脂質(zhì)體,能夠阻止巨噬細(xì)胞對(duì)脂質(zhì)體的識(shí)別和攝取,從而延長(zhǎng)脂質(zhì)體在血中的循環(huán)時(shí)間,進(jìn)而借助EPR效應(yīng)富集到腫瘤組織中,最終實(shí)現(xiàn)腫瘤的被動(dòng)靶向。此外,長(zhǎng)循環(huán)脂質(zhì)體由于表面覆蓋了聚乙二醇(PEG)親水保護(hù)層,能夠避免脂質(zhì)體聚集,可以提高其在儲(chǔ)存期內(nèi)的穩(wěn)定性。

3、>　　 基于以上考慮,本研究采用長(zhǎng)春瑞濱為模型藥物,研究其PEG修飾的脂質(zhì)體制劑,以使所輸送藥物定向釋放、提高藥物的治療指數(shù)、降低藥物的毒性,并且提高藥物的穩(wěn)定性。
　　 方法:在預(yù)實(shí)驗(yàn)的基礎(chǔ)上初步確定長(zhǎng)春瑞濱脂質(zhì)體的制備方法:首先制備以不同銨鹽(如硫酸鹽、對(duì)羥基苯磺酸鹽、磺基水楊酸鹽)為內(nèi)相的空白脂質(zhì)體,然后通過柱透析法置換外相溶液,然后將藥物與空白脂質(zhì)體溶液混合孵育,得到長(zhǎng)春瑞濱脂質(zhì)體。
　　 以包封率為指標(biāo),通過

4、考察不同的內(nèi)相溶液,不同的PEG修飾方法,以及不同的PEG用量對(duì)脂質(zhì)體的影響,最后通過小鼠藥代動(dòng)力學(xué)研究確定了長(zhǎng)春瑞濱脂質(zhì)體的最佳處方。
　　 對(duì)制備得到的長(zhǎng)春瑞濱脂質(zhì)體進(jìn)行了質(zhì)量研究,主要包括其外觀、pH值、滲透壓、粒徑分布、ZETA電位、包封率、體外釋放率、溶血卵磷脂、含量、有關(guān)物質(zhì)等指標(biāo)的測(cè)定。并且進(jìn)行了長(zhǎng)春瑞濱脂質(zhì)體的影響因素和6個(gè)月長(zhǎng)期穩(wěn)定性試驗(yàn)。
　　 選用BDF1小鼠作為動(dòng)物模型,分別對(duì)長(zhǎng)春瑞濱溶液和不同量

5、PEG修飾的脂質(zhì)體進(jìn)行體內(nèi)藥代動(dòng)力學(xué)研究,計(jì)算小鼠體內(nèi)藥動(dòng)學(xué)參數(shù)。
　　 選用BDF1小鼠尾靜脈注射不同劑量的長(zhǎng)春瑞濱游離藥和脂質(zhì)體,進(jìn)行了急性毒性研究,采用小鼠體重下降比例評(píng)價(jià)藥物的最大耐受劑量。
　　 選用BDF1小鼠為動(dòng)物模型,前肢腋下接種Lewis肺癌腫瘤細(xì)胞,分別給予給予長(zhǎng)春瑞濱游離藥和脂質(zhì)體,使用測(cè)量瘤徑的方法,動(dòng)態(tài)觀察受試藥的抗腫瘤作用。
　　 結(jié)果:在雙層PEG修飾的長(zhǎng)春瑞濱脂質(zhì)體研究中發(fā)現(xiàn)了PE

6、G導(dǎo)致藥物泄露的現(xiàn)象,隨后采用后PEG修飾的方法得到了最佳的處方:采用磺基水楊酸作為內(nèi)相,氫化磷脂酰膽堿與膽固醇比例為3:1,每10mg磷脂載藥2mg,之后再加入4.2％的PEG化磷脂進(jìn)行表面修飾,所制備長(zhǎng)春瑞濱脂質(zhì)體包封率接近100％。
　　 質(zhì)量研究結(jié)果顯示:三批長(zhǎng)春瑞濱脂質(zhì)體的平均檢測(cè)結(jié)果如下:pH值為6.52；滲透壓為299 mOsmol/Kg；平均粒徑為94.35nm；平均ZETA電位為-20.09mV；包封率為99.

7、8％；溶血磷脂小于0.5 mg/ml；含量98.8％；總雜質(zhì)0.63％。
　　 穩(wěn)定性結(jié)果顯示:長(zhǎng)春瑞濱脂質(zhì)體對(duì)光照和高溫敏感；產(chǎn)品在2-8℃條件下貯存6個(gè)月,外觀性狀良好,各項(xiàng)指標(biāo)沒有明顯變化,有關(guān)物質(zhì)略有增加,但都在限度內(nèi)。說明脂質(zhì)體在冷藏條件下保存時(shí)穩(wěn)定性較好。
　　 藥動(dòng)學(xué)試驗(yàn)表明:長(zhǎng)春瑞濱溶液和不同量PEG修飾的脂質(zhì)體組的血漿藥代動(dòng)力學(xué)存在顯著差異,脂質(zhì)體處方半衰期均遠(yuǎn)大于游離藥,而外層PEG修飾的脂質(zhì)體之間,

8、分別具有顯著性差異(p<0.05),說明隨著PEG含量的增加,藥物在體內(nèi)循環(huán)時(shí)間延長(zhǎng)。
　　 急性毒性試驗(yàn)表明:長(zhǎng)春瑞濱游離藥與脂質(zhì)體的最大耐受劑量相似,均為43.1mg/kg左右,認(rèn)為脂質(zhì)體沒有明顯減輕藥物毒性的作用。
　　 藥效學(xué)試驗(yàn)結(jié)果表明:與空白對(duì)照組相比,長(zhǎng)春瑞濱游離藥組和脂質(zhì)體組均顯著減緩腫瘤的生長(zhǎng)速率,并且脂質(zhì)體效果明顯優(yōu)于游離藥,其抑瘤效果依次為:脂.30mg/kg>脂15mg/kg>脂7.5mg/kg≈