達(dá)托霉素和克拉霉素共載藥脂質(zhì)體的研究.pdf

1、耐甲氧西林金黃色葡萄球菌(MRSA)引起的感染嚴(yán)重影響了公眾的健康，甚至是已用某些抗生素治療過MRSA引起的感染還會導(dǎo)致高的死亡率，隨著病原體耐藥防控難度的持續(xù)增大，除了不斷研發(fā)新型抗生素之外，對已有抗生素進(jìn)行新制劑創(chuàng)制與聯(lián)合給藥具有同等的重要性。本研究旨在評估達(dá)托霉素和克拉霉素聯(lián)用對耐甲氧西林金黃色葡萄球菌(MRSA)感染的協(xié)同作用效果。
　　本文采用聚乙二醇修飾的脂質(zhì)體作為載體，考察并系統(tǒng)評價經(jīng)優(yōu)化制備的達(dá)托霉素、克拉霉素共載

2、藥脂質(zhì)體(PL[CD])抗耐甲氧西林金葡菌(MRSA252)全身感染。通過優(yōu)化制備得到的達(dá)托霉素、克拉霉素共載藥脂質(zhì)體(PL[CD])平均粒徑（98.2±2.21）nm，多分散系數(shù)為0.251，包封率分別為(92.94±1.21，94.71±1.37)％，載藥量為（8.45±0.11，0.29±0.043）％，粒徑大小均一，并具有良好的穩(wěn)定性。在臨床劑量下，體內(nèi)外評價結(jié)果顯示，達(dá)托霉素和克拉霉素共載藥脂質(zhì)體(PL[CD])與達(dá)托霉素脂質(zhì)

3、體及克拉霉素脂質(zhì)體制劑相比，對MRSA252有更持久的抑制效果，并能顯著提高耐甲氧西林金葡菌全身感染模型小鼠的存活率。上述研究結(jié)果表明，達(dá)托霉素和克拉霉素共載藥脂質(zhì)體在體外能夠顯著增強(qiáng)對抗MRSA的活性，在體內(nèi)能顯著減少MRSA的定植量并能增加宿主的生存率。因此，可為今后臨床應(yīng)用提供相關(guān)的依據(jù)。
　　本課題的主要研究內(nèi)容如下:
　　(1)達(dá)托霉素、克拉霉素體外協(xié)同優(yōu)選方案
　　通過棋盤法對達(dá)托霉素、克拉霉素在體外進(jìn)行聯(lián)

4、合，通過計算，聯(lián)合抑菌指數(shù)(FIC)為0.5，可初步判定達(dá)托霉素與克拉霉素體外聯(lián)用有協(xié)同作用。
　　(2)單藥脂質(zhì)體的制備及體外協(xié)同方案優(yōu)化
　　克拉霉素高效液相色譜法在45℃條件下，使用C18色譜分離柱，流速為0.7mL/min，流動相是含有0.1％三氟乙酸的乙腈與3.5 mM的HCl調(diào)pH至3.5±0.2的0.033 mol/L KH2PO4(40/60，v/v)，檢測波長為205 nm;達(dá)托霉素的高效液相色譜法在35℃

5、條件下，流速為1 mL/min，流動相是乙腈與0.5％的NH4H2PO4(36/64，v/v)，檢測波長為221 nm。
　　通過考察制備達(dá)托霉素長循環(huán)脂質(zhì)體的幾個影響因素:氫化卵磷脂(HSPC)與膽固醇的摩爾比、脂藥質(zhì)量比，最終得出制備達(dá)托霉素長循環(huán)脂質(zhì)體的最優(yōu)處方，就能得到穩(wěn)定的脂質(zhì)體劑型。在4℃的冰箱中保存2個月后幾乎無泄漏、無沉淀現(xiàn)象發(fā)生。成功制備的克拉霉素、達(dá)托霉素單藥脂質(zhì)體聯(lián)合抑菌指數(shù)主要采用棋盤法來測定，得到PL[C

6、]與PL[D]最優(yōu)化的比率為32∶1，此比值用于后續(xù)制備共載藥脂質(zhì)體。
　　(3)共載藥脂質(zhì)體的制備與評價
　　通過優(yōu)化制備得到的達(dá)托霉素、克拉霉素共載藥脂質(zhì)體平均粒徑（98.2±2.21）nm，多分散系數(shù)為0.251，包封率分別為（92.94±1.21，94.71±1.37）％，載藥量為（8.45±0.11，0.29±0.043）％，粒徑大小均一，并具有良好的穩(wěn)定性。
　　體外抗耐甲氧西林金葡菌實驗主要考察達(dá)托霉素三

7、個制劑:克拉霉素脂質(zhì)體(PL[C])、達(dá)托霉素脂質(zhì)體(PL[D])、達(dá)托霉素、克拉霉素共載藥脂質(zhì)體(PL[CD])對MRSA252生長的影響，結(jié)果表明，PL[CD]對MRSA252的抑制效果更持久。生物膜的定性和定量結(jié)果的分析表明，PL(CD)比PL[C]，PL[D]抑制MRSA的效果更強(qiáng)。
　　通過比較PL[C]、PL[D]、PL[CD]對MRSA252致全身感染KM小鼠的治療效果，結(jié)果顯示，臨床劑量下，達(dá)托霉素長循環(huán)脂質(zhì)體能使