高度肺靶向新型脂質(zhì)體載體給藥系統(tǒng)研究.pdf

1、在我國，肺癌、肺結(jié)核等肺部疾病發(fā)病率較高且呈快速遞增發(fā)展趨勢。為了治療這些難治性疾病，我國已投入大量的人力物力，并在藥物治療領(lǐng)域取得了一系列重要進展，但現(xiàn)有治療藥物體內(nèi)分布不具目標(biāo)選擇性，且用藥量大、周期長，產(chǎn)生嚴(yán)重毒副反應(yīng)與耐藥性。對此，理想的治療策略是開發(fā)肺靶向給藥系統(tǒng)。在肺靶向給藥系統(tǒng)中，脂質(zhì)體作為一種毒性小，生物相容性好的載體，因具有緩釋、增加腫瘤靶向、提高藥物穩(wěn)定性以及改善藥物動力學(xué)特性等優(yōu)點而倍受關(guān)注，但其研究水平、生產(chǎn)技術(shù)

2、及產(chǎn)業(yè)化能力有待不斷提高。為此，突破脂質(zhì)體載體給藥系統(tǒng)研究與產(chǎn)業(yè)化的關(guān)鍵技術(shù)，重點推進抗肺癌藥、抗肺結(jié)核藥等肺靶向脂質(zhì)體載體給藥系統(tǒng)研究非常必要。 目的: 本文以針對非小細(xì)胞肺癌（NSCLC）的靶向給藥系統(tǒng)及其生產(chǎn)急需解決的實際問題為切入點。選用多烯紫杉醇（DTX）為模型藥物研制DTX-LP，望能通過脂質(zhì)體給藥系統(tǒng)將DTX傳遞到肺部，真正達到提高療效，降低毒副作用的目的，并切實解決脂質(zhì)體生產(chǎn)瓶頸及肺部靶向性兩大關(guān)鍵科學(xué)問

3、題。 方法: 1.首次將固體分散技術(shù)與泡騰水化技術(shù)組合制備DTX-LP，即先采用固體分散技術(shù)制備DTX前體脂質(zhì)體，再通過泡騰水化制備DTX-LP。 2.采用光學(xué)顯微鏡及透射電鏡法，觀察DTX-LP的形態(tài)。 3.采用馬爾文激光粒度測定儀，測定DTX-LP的粒徑和表面電荷。 4.建立測定DTX-LP制劑的HPLC分析方法，并進行方法學(xué)確證。 5.采用透析法，測定DTX-LP的包封率；考察DTX

4、-LP的體外釋藥特性。 6.采用單因素法，以脂質(zhì)體粒徑、形態(tài)為指標(biāo)，考察篩選顯著影響DTX-LP制備的主要因素。 7.采用正交設(shè)計法，以脂質(zhì)體粒徑分布、包封率、穩(wěn)定性為指標(biāo)，優(yōu)化并確定DTX-LP的制備工藝。 8.建立體內(nèi)生物樣品中DTX含量測定的HPLC分析方法，并進行方法學(xué)確證。 9.基于正交優(yōu)化的處方及工藝，制備不同電荷、不同粒徑的DTX-LP并測定其在兔體內(nèi)1.5h的分布，進一步探討其肺靶向作用并

5、篩選確定其最佳的處方及工藝。 10.采用藥代動力學(xué)方法，考察DTX-LP的藥代動力學(xué)特征。 11.采用5個靶向參數(shù)為指標(biāo)，評價DTX-LP的肺靶向性。 12.采用單次給藥和連續(xù)多次方法，考察DTX-LP的毒性作用。 13.建立荷A549肺癌的裸鼠模型，考察DTX-LP的抗腫瘤活性。 結(jié)果: 一、藥學(xué)部分 1.處方及工藝的研究：經(jīng)單因素試驗發(fā)現(xiàn)，影響脂質(zhì)體的粒徑分布、穩(wěn)定性及包封率的

6、主要因素有DTX和吐溫-80的用量、溶液液面溫度、枸櫞酸與NaHCO3比例。經(jīng)正交試驗確定的工藝所制備的DTX前體脂質(zhì)體為粉末和（或）顆粒狀。所得DTX-LP形態(tài)圓整、分散性好，表面電荷為-23.4mv，平均粒徑為0.90μm，包封率為90.5％。 2.最佳處方及工藝的確定：在前面研究的基礎(chǔ)上，制備不同粒徑和表面電荷的DTX-LP并測定其體內(nèi)組織分布，以肺靶向性為指標(biāo)確定的最佳處方及工藝：即稱取處方量的DTX、HSPC、膽固醇、

7、吐溫-80、枸櫞酸，溶于適量熱乙醇中，趁熱過濾，溫度維持在55℃，攪拌下加入NaHCO3，除去溶劑得到粉末和（或）顆粒狀的DTX前體脂質(zhì)體。用時稱取DTX前體脂質(zhì)體1g，加10mL5％NaHCO3溶液泡騰水化得DTX-LP。 3.DTX-LP質(zhì)量研究：采用最佳處方及工藝制備的DTX前體脂質(zhì)體顆粒流動性好；與5％NaHCO3溶液15min內(nèi)泡騰水化完全。DTX-LP混懸液的pH值為5.5±0.3，脂質(zhì)體形態(tài)圓整，粒徑為0.95±0

8、.12μm，電荷為-23±0.21mv；包封率為90.57±0.32％；體外顯示緩慢釋藥；在密封、遮光和2～8℃干燥條件下保存至少1年質(zhì)量穩(wěn)定。 二、藥理毒理學(xué)部分 1.體內(nèi)生物樣品的分析方法：建立了體內(nèi)生物樣品的HPLC測定方法，該方法專屬性強，干擾峰少，且不影響主藥測定；回收率為80.9％～113.4％，日內(nèi)、日間精密度RSD均小于10％，萃取回收率均大于70％，滿足生物樣品分析要求。 2.肺靶向作用研究：經(jīng)

9、不同粒徑和表面電荷的DTX-LP兔體內(nèi)組織分布研究。其結(jié)果顯示，在粒徑大致相同，帶負(fù)電荷DTX-LP的肺部藥物濃度顯著高于帶正電荷脂質(zhì)體和注射液，且粒徑在1μm左右和負(fù)電荷大于20mv的DTX-LP具有最高的肺組織分布。 3.體內(nèi)組織分布及肺靶向性評價：經(jīng)兔體內(nèi)組織分布試驗結(jié)果表明，本文研制的DTX-LP在各時間點肺組織中DTX濃度均顯著高于DTX注射液。 從靶向參數(shù)角度分析，DTX-LP的肺部相對攝取率（Re）為28.

10、91，顯著高于其他組織和血液，表明DTX-LP顯著增加了肺的靶向性。DTX-LP的肺相對其他組織或血液的靶向效率（Te）值均遠遠大于1，其中相對肝、脾和腎分別為3.16、23.00和27.83；且（Te）liposomes/（Te）injection的比值顯著增加，由此表明，DTX-LP顯著增加了肺部的選擇性。DTX-LP與DTX注射液在肺部藥物峰濃度比（Ce）為74.28，而肝、脾和腎分別為2.93、1.09和1.41，由此表明了DT

11、X-LP完全改變了DTX在兔體內(nèi)的分布，主要被濃集在肺部。DTX-LP肺組織的總靶向系數(shù)（Tce）為63.41，遠高于其它器官組織，比DTX注射液提高了6倍。由重量-總靶向系數(shù)（Tqe）值可知，DTX注射液中DTX在肺分布僅為10.445％，而脂質(zhì)體制劑中有高達52.746％的DTX富集于肺，這將有助于肺部腫瘤的治療，有一定的臨床應(yīng)用價值。 4.體內(nèi)藥動學(xué)研究：DTX-LP和DTX注射液靜脈給藥后，在血液中，兩制劑的藥動學(xué)均符合

12、三室模型，AUC（0-t）分別為0.893和2.130mg/L*h，DTX注射液的分布半衰期t1/2α和消除半衰期t1/2β，分別是0.122和0.207h，而DTX-LP的t1/2α顯著縮短（0.023h），表明脂質(zhì)體能快速從體循環(huán)中分布到靶器官，t1/2β顯著延長（2.186h），有助于發(fā)揮DTX的治療作用。DTX-LP和DTX注射液在肺部靶器官中藥物經(jīng)時變化規(guī)律經(jīng)擬合分別為二室模型和三室模型，AUC（0-t）分別為2428.65和

13、84.00mg/L*h，t1/2α分別為1.414和0.081h，t1/2β分別為8.808和3.481h。 由此可見，DTX-LP在血液及肺靶器官中藥動學(xué)行為有顯著性差異，本文中的DTX-LP在血液中的藥動學(xué)參數(shù)已不能反映靶器官-肺的藥動學(xué)行為。 5.毒性作用的研究：從生存情況方面，與DTX注射液組比較，DTX-LP組動物的平均生存時間提高近一倍；病理切片分析結(jié)果可知，DTX注射液組發(fā)生了嚴(yán)重的病理改變，而DTX-LP

14、組幾乎未見異常變化，由此表明了DTX-LP顯著降低了DTX的全身毒副作用。 6.藥效學(xué)研究：經(jīng)實驗結(jié)果表明，DTX注射液（12mg/kg）的抑瘤率為75.72％；DTX-LP三個劑量組（3mg/kg、6mg/kg和12mg/kg）的抑瘤率分別為61.48％、94.40％和95.40％。 結(jié)論: 1.首次采用固體分散技術(shù)與泡騰技術(shù)組合成功制備DTX-LP。該組合技術(shù)克服了現(xiàn)有脂質(zhì)體生產(chǎn)批量小和質(zhì)量不穩(wěn)定等瓶頸問題，

15、具有良好的工業(yè)化生產(chǎn)前景。 2.首次提出帶負(fù)電荷DTX-LP（1μm左右）具有高度肺靶向的新觀點。 3.本文所研制的DTX-LP是一種有效的肺靶向給藥載體，改變了DTX的藥代動力學(xué)行為，能達到減少DTX的用藥劑量，提高抗腫瘤作用，降低毒副作用的目的，具有廣闊的臨床應(yīng)用前景。 4.本文關(guān)于DTX-LP的研究在國內(nèi)外尚未見報道，具有獨立自主知識產(chǎn)權(quán)，該研究成果將有助于推動前體脂質(zhì)體制劑產(chǎn)品的開發(fā)，為肺癌、肺結(jié)核等肺部