銀杏內(nèi)酯腦靶向給藥載體篩選.pdf

1、目的:探索腦缺血治療藥物腦靶向給藥的新思路、新方法和新技術(shù)。腦血管疾病具有發(fā)病率高、致殘率高、死亡率高和復(fù)發(fā)率高等特點(diǎn),是威脅人類健康的最大殺手之一。而在腦血管疾病中缺血性腦血管病又占多數(shù)約占其總數(shù)的55-80％。因此,研制和開(kāi)發(fā)出新型、有效、副作用小的防治腦缺血的藥物是目前亟待解決的問(wèn)題。
　　銀杏又稱白果,一貫有“植物元老”及“自然界的活化石”之稱。世界各地己經(jīng)將銀杏葉提取物廣泛用于治療呼吸系統(tǒng)、心腦血管系統(tǒng)等疾病。已經(jīng)證實(shí)銀

2、杏內(nèi)酯具有特異性拮抗血小板活化因子的作用。目前己分離得到銀杏內(nèi)酯A,銀杏內(nèi)酯B,銀杏內(nèi)酯C、銀杏內(nèi)酯M、銀杏內(nèi)酯J及白果內(nèi)酯,其中銀杏內(nèi)酯A的抗血小板活化因子的作用僅次于銀杏內(nèi)酯B。
　　本論文采用納米技術(shù),分別選擇可生物降解及較好生物相容性的聚乳酸(PLA)和生物降解型高分子材料硬脂酸為載體,以銀杏內(nèi)酯A為模型藥物,采用現(xiàn)代靶向制劑技術(shù),制備了腦靶向性銀杏內(nèi)酯A聚乳酸納米粒(GA-PLA-NP)和銀杏內(nèi)酯A固體脂質(zhì)體(GA-SL

3、N).對(duì)納米粒進(jìn)行了外觀形態(tài)學(xué)、粒徑、粒度分布研究;建立了HPLC法測(cè)定GA的含量,經(jīng)專屬性和方法學(xué)認(rèn)證,確定了該方法的可行性,并進(jìn)行了納米粒包封率、載藥量等實(shí)驗(yàn)研究;建立了HPLC-ELSD法測(cè)定血漿中GA的濃度,研究了腦靶向性銀杏內(nèi)酯A聚乳酸納米粒和銀杏內(nèi)酯A固體脂質(zhì)體在小鼠體內(nèi)的藥物動(dòng)力學(xué),通過(guò)小鼠組織分布的研究,評(píng)價(jià)和比較了銀杏內(nèi)酯A聚乳酸納米粒和銀杏內(nèi)酯A固體脂質(zhì)體的靶向性,為腦靶向給藥提供科學(xué)的理論依據(jù)。
　　方法:采

4、用脫溶劑法制備銀杏內(nèi)酯A聚乳酸納米粒和乳化蒸發(fā)-低溫固化法制備銀杏內(nèi)酯A固體脂質(zhì)體。采用正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)優(yōu)化、篩選最佳處方和制備工藝;采用電子透射顯微鏡觀察納米粒的外觀形態(tài),MALVERN ZETASIZER3000HS激光粒度儀分析粒徑及粒度分布;低溫超速離心法測(cè)定固體脂質(zhì)納米粒的包封率、載藥量;以GA甘油、乙醇混合溶液為參比制劑,進(jìn)行GA-PLA-NP和GA-SLN小鼠體內(nèi)藥物動(dòng)力學(xué)和體內(nèi)組織分布學(xué)研究及靶向性評(píng)價(jià)。
　　結(jié)果:影

5、響聚乳酸納米粒粒徑和包封率的主要因素為水相有機(jī)相比、TWEEN80濃度、攪拌速度、投藥量;而固體脂質(zhì)體粒徑和包封率主要受卵磷脂硬脂酸比、TWEEN80和甘露醇濃度、乳化溫度、攪拌速度等;最佳優(yōu)化處方與工藝聚乳酸納米粒為:有機(jī)相水相比為1:15;TWEEN80濃度為4％;攪拌速度為1000r/min;投藥量為10mg;固體脂質(zhì)體為:卵磷脂硬脂酸比1:2;TWEEN80和甘露醇濃度為2％+1％;乳化溫度為75℃;攪拌速度為1000r/min

6、。優(yōu)化處方和工藝制備的GA聚乳酸納米粒和GA固體脂質(zhì)納米,透射電鏡下大量呈現(xiàn)圓整、均勻的球形微粒,無(wú)粘連,GA-PLA-NP平均粒徑為127.5nm,GA-SLN平均粒徑為142.7nm。
　　采用HPLC法,以甲醇溶液為溶媒,測(cè)定GA-PLA-NP和GA-SLN中GA的含量,輔料不干擾測(cè)定,專屬性強(qiáng),方法簡(jiǎn)便、靈敏,GA在0.2-1.0mg/mL濃度范圍內(nèi),線性關(guān)系良好,回歸方程為y=1103.5x+14.614,R2=0.99

7、98;日內(nèi)、日間精密度的RSD均小于4％,平均回收率大于99％。測(cè)得GA-PLA-NP載藥量為2.48％±0.002,包封率為54.00％±1.51;GA-SLN載藥量為3.60％±0.07,包封率為62.71％±1.20.
　　建立了高效液相蒸發(fā)光散射法測(cè)定GA血藥濃度及在體內(nèi)各組織分布的方法,生物樣品預(yù)處理方法簡(jiǎn)單,在所選色譜條件下,雜質(zhì)不干擾GA的測(cè)定,回收率高,重現(xiàn)性好。小鼠血漿方法平均回收率為99.44％,日內(nèi)精密度的R

8、SD小于2％、日間精密度的RSD小于3％;血漿GA濃度在1.3-57μg/mL范圍內(nèi)線性關(guān)系良好(R2=0.9983),定量下限為1.3μg/mL。小鼠肝臟方法平均回收率為100.92％,腦方法平均回收率為101.41％,日內(nèi)精密度RSD均小于2％,日間精密度RSD均小于3％;各組織中GA濃度在1.3-57μg/mL范圍內(nèi)線性關(guān)系良好,定量下限為1.3μg/mL,可滿足生物樣品分析方法的要求。
　　小鼠體內(nèi)動(dòng)力學(xué)和小鼠組織器官分布

9、實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,小鼠尾靜脈注射GA溶液藥-時(shí)曲線符合單室模型特征,半衰期(tl/2)為175.315min,GA-PLA-NP藥-時(shí)曲線符合單室模型特征,t1/2為1241.349min,GA-SLN藥-時(shí)曲線也符合單室模型特征,t1/2為1564.575min。小鼠尾靜脈注射GA-PLA-NP、GA-SLN后,比GA溶液相靶向效率(Te)0.567分別高出倍和3.07倍。
　　結(jié)論:GA對(duì)腦缺血損傷的保護(hù)作用顯著,但目前普通的口服

10、制劑分布全身,腦組織分布少,對(duì)其他組織器官副作用大,制成聚乳酸納米粒和固體脂質(zhì)體后藥物有效地靶向輸送、濃集于腦病變部位,減少用藥劑量和用藥次數(shù),降低毒副作用,提高治療指數(shù)。體內(nèi)藥物動(dòng)力學(xué)研究結(jié)果表明,GA制成聚乳酸納米粒和固體脂質(zhì)體后,具有緩釋作用,半衰期分別約為注射GA溶液的7.08倍和8.92倍;小鼠體內(nèi)組織分布學(xué)研究結(jié)果表明,GA制成聚乳酸納米粒和固體脂質(zhì)體后,與GA溶液比較,腦靶向作用明顯增加,GA-SLN優(yōu)于GA-PLA-NP