左氧氟沙星脂質(zhì)體的肺靶向性研究.pdf

1、目的：肺部感染是人類的跨世紀(jì)疾病，嚴(yán)重地危害著人類健康，是我國(guó)的常見病、多發(fā)病。雖然抗生素的開發(fā)與研究，為防治感染性疾病提供了有利條件。但由于抗生素的濫用，細(xì)菌多藥耐藥性的產(chǎn)生，降低了治療肺部感染的效能，使治療的成功率大為降低。此外，抗生素本身對(duì)肺部較低的靶向性及對(duì)其他部位一些副作用，也給肺部感染的治療增加了難度。所以，研究和發(fā)展一種能夠增強(qiáng)抗生素在肺部抗菌活性的藥物傳遞系統(tǒng)是非常有必要的。 左氧氟沙星（Levofloxacin

2、，LVFX）是第三代喹諾酮類藥物，由于其抗菌譜廣，抗菌力強(qiáng)，目前已成為臨床治療感染性疾病的主要藥物。但是不良反應(yīng)的發(fā)生、一些細(xì)菌對(duì)其產(chǎn)生的耐藥性及廣泛的分布性造成的在肺部位濃度低，在一定程度上也制約了其在臨床上的應(yīng)用。近年來，通過新的制劑手段如脂質(zhì)體、納米粒增加抗生素的活性，提高肺部治療效能受到了廣大科研工作者的青睞。 脂質(zhì)體具有類似生物膜結(jié)構(gòu)的雙分子層膜，與細(xì)胞膜組成相似，即與細(xì)胞膜的有高度親和性，通過和細(xì)胞膜發(fā)生融合作用，可

3、增強(qiáng)細(xì)胞攝取，實(shí)現(xiàn)細(xì)胞內(nèi)藥物傳輸，能夠提高生物利用度，抵抗細(xì)菌的抗藥性，經(jīng)靜脈注射后能夠?qū)崿F(xiàn)靶向和緩釋作用。通過控制脂質(zhì)體的粒徑可以實(shí)現(xiàn)被動(dòng)靶向，粒徑大于5μm的脂質(zhì)體易被肺部的毛細(xì)血管截留，將藥物包裹于大粒徑的脂質(zhì)體中可以實(shí)現(xiàn)抗生素在肺部的蓄積，提高其在肺部的抗菌活性。脂質(zhì)體作為一種非常有前景的載體，在抗生素治療肺部感染方面一直受到了科研工作者的關(guān)注。 基于上述特點(diǎn)構(gòu)建了左氧氟沙星脂質(zhì)體的給藥系統(tǒng)，將左氧氟沙星包裹于大粒徑脂質(zhì)

4、體中，將其被動(dòng)靶向到肺，使其在肺部更好的發(fā)揮治療效能，同時(shí)脂質(zhì)體的包裹可使藥物緩慢的釋放，延長(zhǎng)其半衰期，同時(shí)也降低左氧氟沙星在一些非靶部位的分布，有利于降低其副作用。由于左氧氟沙星為兩親性弱堿性藥物，采用傳統(tǒng)的被動(dòng)載藥法包封率低，而采用包封率高的硫酸銨梯度法來制備，又存在穩(wěn)定性差、室溫放置不穩(wěn)定等缺陷，在試驗(yàn)中我們采用了硫酸銨梯度法制備了包封率高的脂質(zhì)體，并采用PEG2000對(duì)脂質(zhì)體進(jìn)行包衣以期達(dá)到增加穩(wěn)定性的目的。 方法與結(jié)果

5、：采用紫外分光光度法測(cè)定左氧氟沙星的含量，輔料不干擾測(cè)定，專屬性強(qiáng)，方法簡(jiǎn)便、靈敏，該法適合左氧氟沙星的測(cè)定。采用高速離心法對(duì)左氧氟沙星脂質(zhì)體及包衣脂質(zhì)體的包封率進(jìn)行測(cè)定，可以將脂質(zhì)體與未包封藥物完全分離，回收率符合測(cè)定要求。 分別采用了薄膜分散法、逆相蒸發(fā)法、乙醇注入法及硫酸銨梯度法制備左氧氟沙星脂質(zhì)體，以包封率為評(píng)價(jià)指標(biāo)，在單因素考察基礎(chǔ)上，采用正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)優(yōu)化脂質(zhì)體的處方組成和制備工藝；將優(yōu)化處方和工藝制備的脂質(zhì)體，用PE

6、G 2000包衣，考察PEG2000的加入方法及用量對(duì)穩(wěn)定性的影響。結(jié)果表明：硫酸銨梯度法制備的左氧氟沙星脂質(zhì)體包封率最高，優(yōu)化的最佳處方組成為：磷脂與膽固醇之比為（8：1，g/g），藥脂比為（1：8，g/g），硫酸銨的濃度為0.3mol/L；最佳制備工藝條件為：透析時(shí)間為18h，孵育溫度為50℃，孵育時(shí)間為20min；將1％PEG2000水溶液和左氧氟沙星溶液同時(shí)加入空白脂質(zhì)體中，50℃時(shí)孵育，穩(wěn)定性最好。 采用電子透射顯微鏡

7、觀察脂質(zhì)體的外觀形態(tài)；激光散射粒度分析儀測(cè)定脂質(zhì)體的粒徑及其粒度分布；電勢(shì)顯微電泳儀測(cè)定脂質(zhì)體表面Zeta電位；動(dòng)態(tài)膜透析法測(cè)定脂質(zhì)體的體外釋藥特性，以零級(jí)動(dòng)力學(xué)方程、一級(jí)動(dòng)力學(xué)方程、Higuchi方程和Weibull方程等數(shù)學(xué)模型擬合脂質(zhì)體的體外釋藥動(dòng)力學(xué)；冰箱4℃貯存，考察了兩種脂質(zhì)體的初步穩(wěn)定性。結(jié)果表明：兩種脂質(zhì)體外觀均呈橢圓形，大小均勻，未包衣左氧氟沙星脂質(zhì)體指紋狀結(jié)構(gòu)明顯，PEG包衣后的脂質(zhì)體指紋狀結(jié)構(gòu)不明顯，可能是PEG2

8、000的加入覆蓋了脂質(zhì)體的外層，掩飾了脂質(zhì)體的部分指紋；未包衣和包衣左氧氟沙星脂質(zhì)體的平均粒徑分別為（7.424±0.689）μm和（6.28±0.891）μm；Zeta電位分別為（+13.11±1.08）mV和（-12.88±0.81）mV。兩種脂質(zhì)體的pH均在5.5-6.0之間，符合注射劑的要求；體外釋放與藥物溶液相比均表現(xiàn)了明顯的緩釋作用，均符合Weibull方程，其中PEG2000包衣脂質(zhì)體的緩釋作用更明顯。初步穩(wěn)定性試驗(yàn)結(jié)果表

9、明，PEG2000脂質(zhì)體的包衣對(duì)左氧氟沙星脂質(zhì)體起到了明顯的穩(wěn)定作用。 采用HPLC法測(cè)定家兔血漿、小鼠血漿及組織中的左氧氟沙星的濃度，并進(jìn)行了方法學(xué)考察。以左氧氟沙星注射液為對(duì)照，對(duì)左氧氟沙星脂質(zhì)體及PEG包衣左氧氟沙星脂質(zhì)體進(jìn)行了藥動(dòng)學(xué)與組織分布動(dòng)力學(xué)的研究；以相對(duì)攝取率（Re）、相對(duì)靶向效率（Te）、峰面積之比（Ce）等靶向性參數(shù)為指標(biāo)，對(duì)脂質(zhì)體的靶向性進(jìn)行了評(píng)價(jià)。結(jié)果表明，在所選色譜條件下，內(nèi)源性物質(zhì)不干擾左氧氟沙星的測(cè)

10、定，家兔血漿平均提取回收率大于90％，方法回收率在95％～105％之間，日內(nèi)、日間精密度RSD小于4％，標(biāo)準(zhǔn)曲線方程A=40761 C+24093（r＝0.9989），血藥濃度在0.1～50μg /ml范圍內(nèi)線性關(guān)系良好；小鼠各組織器官平均提取回收率均大于90％，方法回收率在95％～105％之間，日內(nèi)、日間精密度均小于4％，小鼠血漿、各組織線性范圍為0.1～50μg/ml，線性關(guān)系良好，上述試驗(yàn)結(jié)果均滿足生物樣品測(cè)定要求。與注射液相比，

11、兩種脂質(zhì)體家兔體內(nèi)的藥動(dòng)學(xué)發(fā)生了明顯變化，平均滯留時(shí)間（MRT）、消除半衰期（t1/2β，p<0.05）、表觀分布容積（V）均有所增加；PEG2000包衣脂質(zhì)體t1/2β較未包衣脂質(zhì)體延長(zhǎng)。靶向性評(píng)價(jià)結(jié)果表明，將左氧氟沙星制成脂質(zhì)體后，肺靶向性大大提高，相反降低了心、腎中的藥物濃度。PEG2000包衣脂質(zhì)體與未包衣脂質(zhì)體的體內(nèi)分布沒有顯著性差異。 結(jié)論：本課題成功研制了具有肺靶向性的左氧氟沙星脂質(zhì)體，所采用的制備工藝簡(jiǎn)便可行，重

12、現(xiàn)性好，包封率較高，經(jīng)PEG2000包衣后體外穩(wěn)定性良好。將左氧氟沙星制備成脂質(zhì)體后，明顯改變了藥物的體內(nèi)配置，與注射劑相比，脂質(zhì)體制劑使藥物蓄積于肺部，增加了肺部的局部藥物濃度，緩慢平穩(wěn)釋放藥物，維持炎癥部位長(zhǎng)時(shí)間的有效藥物濃度，并且可以減少非靶部位如心、腎、腦的蓄積，有效提高作用部位的藥物濃度，降低非把部位的藥物濃度，從而可提高療效，降低副作用，減少用藥次數(shù)，延長(zhǎng)藥物在作用部位時(shí)間，減輕病人痛苦，提高病人用藥的順應(yīng)性和用藥水平，具有