肺靶向的磷酸特地唑胺陽離子脂質(zhì)體的構(gòu)建及體內(nèi)外評(píng)價(jià).pdf

1、磷酸特地唑胺(Tedizolid phosphate)是第二代新型惡唑烷酮類抗菌藥，由美國(guó)CUBIST生物制藥公司研發(fā)。作為特地唑胺的前藥，在口服或靜脈注射后，磷酸特地唑胺能通過磷酸酯酶的催化轉(zhuǎn)化為特地唑胺。特地唑胺的抗菌機(jī)理是與細(xì)菌核糖體的50S亞基結(jié)合，從而抑制合成細(xì)菌蛋白質(zhì)并發(fā)揮抗菌效果。因此，它與其它抗菌藥發(fā)生交叉耐藥的現(xiàn)象較為少見。臨床研究表明，與利奈唑胺（第一代惡唑烷酮類抗菌藥）相比，磷酸特地唑胺的半衰期更長(zhǎng)，臨床療效更好，

2、且縮短了近一半的治療周期。然而，磷酸特地唑胺在室溫下不穩(wěn)定，易水解，貯藏和運(yùn)輸不便。用于肺炎的治療，肺部靶向性不高。而單純靠增加劑量來提高肺部藥物濃度和平均滯留時(shí)間，會(huì)導(dǎo)致耐藥性發(fā)生的風(fēng)險(xiǎn)。
　　脂質(zhì)體，作為一種極具潛力的緩控釋系統(tǒng)，水溶性藥物和脂溶性藥物皆可被其包封。尤其作為抗菌藥物載體有著諸多優(yōu)勢(shì):①.改善藥物代謝動(dòng)力學(xué)和生物學(xué)分布;②.提高抗菌藥的抗菌效果并降低致病菌對(duì)于抗菌藥物的耐藥性;③.具有部位靶向選擇性。此外，粒徑和

3、電位是影響脂質(zhì)體被動(dòng)肺靶向的重要因素。因此，陽離子脂質(zhì)體除具有以上優(yōu)勢(shì)外，由于粒徑較普通脂質(zhì)體大且荷正電具有較好的肺靶向性，可以提高肺部的藥物濃度及有效濃度維持時(shí)間;還可以減少脂質(zhì)體在貯存期間的粒徑變化，維持脂質(zhì)體的穩(wěn)定性?？傊瑢?duì)于抗菌藥載體來說，陽離子脂質(zhì)體不僅穩(wěn)定性和肺靶向性有所提高，而且具有生物膜親和性強(qiáng)，對(duì)于肺炎的治療具有不可替代的優(yōu)勢(shì)。
　　本課題以磷酸特地唑胺為模型藥物，以注射用大豆卵磷脂和膽固醇為膜材，采用逆相蒸發(fā)

4、法法制備磷酸特地唑胺陽離子脂質(zhì)體。目的在于提高磷酸特地唑胺的穩(wěn)定性和部位靶向性，改善治療效果，降低耐藥性的發(fā)生。本課題的主要內(nèi)容包括磷酸特地唑胺普通脂質(zhì)體和陽離子脂質(zhì)體的制備及性質(zhì)表征;體外釋藥性和初步安全性評(píng)價(jià);小鼠體內(nèi)藥物動(dòng)力學(xué)及組織分布試驗(yàn)研究評(píng)價(jià)磷酸特地唑胺陽離子脂質(zhì)體的緩釋性和靶向性。
　　1.磷酸特地唑胺普通脂質(zhì)體的制備與性質(zhì)表征
　　建立了紫外分光光度法(UV)測(cè)定磷酸特地唑胺的含量，方法學(xué)考察結(jié)果表明:輔料對(duì)

5、藥物的含量測(cè)定干擾較小，且精密度和回收率的結(jié)果也都滿足測(cè)定的要求。超濾離心法具有高回收率，重現(xiàn)性好等優(yōu)點(diǎn)，因此可用于測(cè)定脂質(zhì)體的包封率。根據(jù)磷酸特地唑胺的溶解特性，選擇粒徑、包封率和載藥量為考察指標(biāo)，對(duì)制備方法和處方工藝進(jìn)行了較為系統(tǒng)的研究。最后確定了采用逆相蒸發(fā)法來制備磷酸特地唑胺的脂質(zhì)體，并結(jié)合單因素試驗(yàn)和正交試驗(yàn)，最終優(yōu)選出最佳的處方工藝;按照最佳處方工藝制備的磷酸特地唑胺脂質(zhì)體形狀呈類球形，且大小分布均勻，平均粒徑為(184.9

6、±8.3) nm，平均Zeta電位為(-22.8±0.15) mV，包封率為(55.10±1.94)％，載藥量為(4.51±0.24)％，平均pH值為6.83±0.06，符合注射要求;處方和制備工藝合理可行。
　　2.磷酸特地唑胺陽離子脂質(zhì)體的制備與性質(zhì)表征
　　分別制備了殼聚糖包裹的磷酸特地唑胺脂質(zhì)體(c-TDZA-Lips)和硬脂胺修飾的磷酸特地唑胺脂質(zhì)體(SA-TDZA-Lips)，通過對(duì)分子量、用量、體積比以及電位等

7、單因素進(jìn)行考察，確定了c-TDZA-Lips的最佳處方。通過對(duì)電位的單因素考察，確定了SA-TDZA-Lips的最優(yōu)處方。制備的c-TDZA-Lips和SA-TDZA-Lips在透射電鏡下觀察均呈類球形，大小分布均勻。兩種磷酸特地唑胺陽離子脂質(zhì)體的Zeta電位均從荷負(fù)電轉(zhuǎn)變成了荷正電。c-TDZA-Lips和SA-TDZA-Lips的粒徑分別為(214.3±4.2) nm和(194.9±2.93)nm，平均Zeta電位分別為(19.5±

8、2.10) mV和(20.4±1.10) mV，包封率分別為(55.38±2.18)％和(53.52±2.18)％，平均pH值分別為4.30和8.86，符合注射要求;三批脂質(zhì)體的重現(xiàn)性試驗(yàn)結(jié)果表明，處方工藝重現(xiàn)性良好，制備工藝可行。
　　3.磷酸特地唑胺普通脂質(zhì)體與陽離子脂質(zhì)體的體外釋藥性及初步安全性評(píng)價(jià)
　　采用動(dòng)態(tài)膜透析法比較TDZA-Lips，c-TDZA-Lips和SA-TDZA-Lips三種磷酸特地唑胺脂質(zhì)體制劑的

9、體外釋放特性。相比于TDZA-Inj組，TDZA-Lips，c-TDZA-Lips和SA-TDZA-Lips三種脂質(zhì)體體外釋藥曲線相似，均具有不同程度的緩釋效果，且釋放曲線與weibull方程相符。其中c-TDZA-Lips釋放相對(duì)更緩慢，SA-TDZA-Lips次之。另外，從體外溶血試驗(yàn)的結(jié)果來看，TDZA-Lips和SA-TDZA-Lips都未發(fā)現(xiàn)溶血或凝集，因此制劑安全可靠，可供靜脈注射。而c-TDZA-Lips除2號(hào)管以外，其余

10、試管均出現(xiàn)不同程度的溶血，初步安全性不合格，不可用于靜脈注射。
　　4.體內(nèi)藥物動(dòng)力學(xué)和組織分布研究
　　建立了高效液相色譜法(HPLC)測(cè)定磷酸特地唑胺在小鼠血漿和各組織器官中的濃度。以磷酸特地唑胺注射劑為對(duì)照制劑，研究小鼠尾靜脈注射TDZA-Lips和SA-TDZA-Lips后的血漿藥物動(dòng)力學(xué)和在心、肝、脾、肺、腎、腦等組織中分布的變化，計(jì)算了各個(gè)制劑組在小鼠體內(nèi)藥物動(dòng)力學(xué)參數(shù)和體內(nèi)各組織器官的靶向參數(shù)。小鼠體內(nèi)藥物動(dòng)力

11、學(xué)研究結(jié)果表明，與TDZA-Inj組相較，TDZA-Lips組和SA-TDZA-Lips組的平均滯留時(shí)間（MRT0-6）分別延長(zhǎng)到2.39倍、2.80倍，血漿清除率CL分別減少了0.64倍和0.71倍，消除半衰期分別延長(zhǎng)到1.15和1.51倍，AUC0-∞分別增加了1.76倍和2.40倍。這些變化都有助于提高磷酸特地唑胺的抗菌效果。小鼠體內(nèi)組織分布試驗(yàn)結(jié)果表明，經(jīng)硬脂胺修飾后的SA-TDZA-Lips組在肺部的AUC增加了0.72倍。這

12、是由于經(jīng)硬脂胺修飾后的脂質(zhì)體帶有正電荷，與肺部細(xì)胞的親和力增強(qiáng)，攝取增加。SA-TDZA-Lips組在肺部的相對(duì)攝取率Re為1.527＞1，具有肺靶向性。這些均說明硬脂胺的修飾使得脂質(zhì)體在肺部的分布增加，靶向性增強(qiáng)，這對(duì)于肺部炎癥的治療有很大優(yōu)勢(shì)。
　　綜上，本研究構(gòu)建的硬脂胺修飾的磷酸特地唑胺陽離子脂質(zhì)體，與預(yù)期的藥物動(dòng)力學(xué)和組織分布特點(diǎn)相符。由于抗菌藥應(yīng)用廣泛，是大部分抗感染治療的基本原則。因此，此項(xiàng)研究所構(gòu)建的磷酸特地唑胺陽