遞送siRNA陽離子脂質(zhì)體的制備及其體內(nèi)外的研究.pdf

1、siRNA能誘導(dǎo)同源序列的信使RNA降解，使相關(guān)基因無法表達(dá)而抑制惡性腫瘤的發(fā)生發(fā)展。TAZ基因?qū)Χ喾N腫瘤的發(fā)生及發(fā)展起著促進(jìn)作用，因此通過siRNA干擾TAZ基因?qū)Ω伟┘?xì)胞的影響值得探究。陽離子脂質(zhì)體是目前研究廣泛的遞送siRNA的載體。
　　本文旨在制備毒性低、轉(zhuǎn)染效率高的陽離子脂質(zhì)體，為siRNA體外和體內(nèi)的遞送提供有效的載體。探討運(yùn)用siRNA沉默TAZ基因?qū)θ烁伟┘?xì)胞HepG2增殖、侵襲和轉(zhuǎn)移的影響。從而找尋針對(duì)肝癌細(xì)胞

2、治療的新靶點(diǎn)，為發(fā)展肝癌基因治療奠定理論和實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。
　　第一部分主要構(gòu)建遞送siRNA的陽離子脂質(zhì)體，并對(duì)其理化性質(zhì)進(jìn)行表征。運(yùn)用薄膜分散超聲法制備脂質(zhì)體，超聲功率為30％，超聲時(shí)間為24 min;脂質(zhì)體的處方為DOTAP∶ DOPE∶ HSPC∶ Chol∶ DSPE-PEG2000-Mal=10∶10∶33∶23.5∶2.5，脂質(zhì)體/siRNA復(fù)合物粒徑為164.63 nm，Zeta電位為+18.90 mV，結(jié)合率為93.0

3、0％;透射電鏡下脂質(zhì)體/siRNA復(fù)合物為均勻的類球狀結(jié)構(gòu);脂質(zhì)體/siRNA復(fù)合物在1％至5％(w/v)氯化鈉溶液中穩(wěn)定。
　　第二部分主要對(duì)脂質(zhì)體的體外毒性、轉(zhuǎn)染效率及攝取機(jī)制進(jìn)行初步體外水平的研究。脂質(zhì)體的毒性小于市售轉(zhuǎn)染試劑XsTR(P＜0.05);共聚焦顯微鏡顯示轉(zhuǎn)染4h后即有大量siRNA進(jìn)入細(xì)胞質(zhì)內(nèi);脂質(zhì)體與XsTR相比轉(zhuǎn)染能力相當(dāng)，并且血清并不影響其轉(zhuǎn)染效果;脂質(zhì)體可能主要是通過非能量依賴的膜融合途徑進(jìn)入細(xì)胞。

4、r>　　第三部分主要闡述用siRNA沉默TAZ基因?qū)Ω伟┘?xì)胞增殖、侵襲和轉(zhuǎn)移的影響。脂質(zhì)體與市售轉(zhuǎn)染試劑的基因沉默效果并無顯著差異(P＞0.05);在HepG2細(xì)胞中，轉(zhuǎn)染TAZ-siRNA后，TAZ的蛋白表達(dá)水平降低(P＜0.05)，第五天及第七天細(xì)胞增殖能力較對(duì)照組降低(P＜0.05)，細(xì)胞遷移能力和侵襲能力較對(duì)照組降低(P＜0.05)。
　　第四部分主要闡述脂質(zhì)體/siRNA復(fù)合物在裸鼠原位肝癌模型的分布。構(gòu)建裸鼠原位肝癌模