陽離子脂質體為載體的基因體內遞送效果研究.pdf

1、目的:
　　 考察自制的陽離子脂質體作為載體，在小鼠體內遞送DNA及RNA的效果及其體內安全性。
　　 方法:
　　 (1)以熒光素酶為目的基因，分別以自制的8種陽離子脂質體為載體，對攜帶熒光素酶基因的質粒pGFP-N2在小鼠體內進行轉染。通過WesternBlotting檢測轉染后小鼠肺和肝臟中熒光素酶的表達，評價陽離子脂質體在小鼠體內遞送DNA的效果。(2)以自制的4種陽離子脂質體為載體轉染小鼠，對載脂蛋白B

2、(ApoplipoproteinB，ApoB)進行體內RNA干擾。RT-PCR檢測小鼠肝臟中ApoBmRNA的表達，ELISA、WesternBlotting檢測小鼠肝臟及血漿中ApoB蛋白的表達，評價陽離子脂質體在小鼠體內遞送siRNA的效果。(3)在進行體內轉染的同時通過考察小鼠的體重變化、內臟變化、死亡率等指標評價所用陽離子脂質體的體內安全性。
　　 結果:
　　 (1)以自制的8種陽離子脂質體9、10、17、19

3、、20、21、22、CD01為載體進行體內DNA轉染，通過WesternBlotting檢測到轉染組小鼠肝臟和肺中有熒光素酶蛋白的表達，表明所考察的陽離子脂質體均有體內遞送DNA的作用，且自制的陽離子脂質體和商品脂質體Lipofectamine2000效果相近。殼聚糖作為促進劑可以幫助脂質體在體內將質粒運送至靶器官和靶細胞。(2)分別以自制脂質體9、21、CTA、CPA為載體進行體內RNA干擾，通過WesternBlotting及RT-

4、PCR的方法檢測到CTA及CPA干擾組的小鼠ApoB在mRNA及蛋白水平的表達明顯低于對照組，表明這兩種陽離子脂質體可在體內將siRNA遞送至靶部位并使其發(fā)揮基因沉默作用。殼聚糖對RNA干擾效果有促進作用。(3)所考察的陽離子脂質體-基因復合物尾靜脈注射會對小鼠的健康狀態(tài)產生影響，與Lipofectamine2000相比毒性較低。
　　 結論:
　　 實驗考察的陽離子脂質體具有體內遞送DNA及RNA的作用;有一定的毒性，