替諾福韋陽(yáng)離子脂質(zhì)體的制備和細(xì)胞攝取研究.pdf

1、替諾福韋為核苷類藥物，具有較強(qiáng)抗HIV，HBV活性。為提高替諾福韋的療效，降低腎毒性，本課題采用一種新穎的方法制備替諾福韋脂質(zhì)體，以掩蓋其負(fù)電性，提高生物利用度。迄今為止，國(guó)內(nèi)外尚未見到有關(guān)替諾福韋脂質(zhì)復(fù)合物的研究報(bào)道。 在課題中，我們采用薄膜水合法制備空白脂質(zhì)體，用擠壓法控制粒徑。緩慢滴加適量乙醇，隨后滴加替諾福韋溶液，共孵育后透析除去乙醇。建立了高效液相測(cè)定脂質(zhì)體及水相溶液中替諾福韋含量的方法，用Sephadex凝膠柱過濾法

2、分離替諾福韋脂質(zhì)體和游離替諾福韋，測(cè)定包封率。此法簡(jiǎn)便、選擇性強(qiáng)、重現(xiàn)性好。以包封率為主要指標(biāo)，對(duì)不同處方和制備方法進(jìn)行評(píng)價(jià)。對(duì)影響包封率較大的因素進(jìn)行單因素分析，篩選出最佳處方為藥脂比0.03，脂質(zhì)處方DSPC:CHOL:DMTAP: Cerebrosides: DSPE-PEG（6:3:2:1:0.5，摩爾比），包封率為86.05±2.20％。用PCS儀測(cè)定粒徑分布及表面電位，其平均粒徑為278.4±67.6nm，多分散系數(shù)為0.1

3、17-0.350，Zeta 電位為 31±5mv。脂質(zhì)體在4℃HEPES緩沖體系保存穩(wěn)定性超過五周。 進(jìn)一步地，我們嘗試在脂質(zhì)體處方中加入半乳糖基及PEG修飾的脂質(zhì)，以SMMC7721細(xì)胞為模型，研究脂質(zhì)體處方對(duì)肝實(shí)質(zhì)細(xì)胞攝取替諾福韋的促進(jìn)作用。建立了液相質(zhì)譜聯(lián)用檢測(cè)細(xì)胞樣品中替諾福韋含量的方法，方法靈敏度高，快速。結(jié)果表明，修飾的脂質(zhì)體處方較游離藥物進(jìn)入肝細(xì)胞的濃度明顯提高，且時(shí)間延長(zhǎng)，說明替諾福韋脂質(zhì)體具有一定的長(zhǎng)循環(huán)性和靶