替諾福韋酯對(duì)神經(jīng)的損傷與機(jī)制研究.pdf

1、目的:應(yīng)用替諾福韋酯溶液作用于體外培養(yǎng)的SH-SY5Y細(xì)胞、神經(jīng)元和鼠腦片神經(jīng)元，觀察不同濃度替諾福韋酯溶液對(duì)細(xì)胞存活率、凋亡及相關(guān)指標(biāo)的影響。研究以不同類型的細(xì)胞為模型，初步探討替諾福韋酯對(duì)神經(jīng)的損傷和作用機(jī)制及替諾福韋酯長(zhǎng)期應(yīng)用與艾滋病腦病的關(guān)系。
　　方法:通過MTT比色法檢測(cè)替諾福韋酯對(duì)細(xì)胞存活率的影響；酶標(biāo)法檢測(cè)替諾福韋酯對(duì)細(xì)胞培養(yǎng)液中LDH活性的影響；利用Hoechst-33342染色觀察替諾福韋酯對(duì)細(xì)胞形態(tài)上的變化特

2、征；應(yīng)用原位末端轉(zhuǎn)移酶標(biāo)記法（TUNEL）和Annexin V/PI標(biāo)記染色流式細(xì)胞儀檢測(cè)替諾福韋損傷細(xì)胞的凋亡情況；細(xì)胞丙二醛（MDA）測(cè)試試劑盒測(cè)定細(xì)胞內(nèi)丙二醛（MDA）的量；DCFH-DA染色法檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)活性氧（ROS）水平；TUNEL法檢測(cè)替諾福韋酯對(duì)腦片神經(jīng)細(xì)胞凋亡的影響；Caspase-3試劑盒檢測(cè)替諾福韋酯對(duì)細(xì)胞內(nèi)Caspase-3的活化程度的影響。
　　結(jié)果:MTT法和LDH法結(jié)果發(fā)現(xiàn)替諾福韋酯抑制SH-SY5Y細(xì)

3、胞和神經(jīng)元細(xì)胞的生長(zhǎng)，隨著替諾福韋酯濃度的增加對(duì)細(xì)胞的抑制作用越明顯（P＜0.05），說明替諾福韋酯氧化損傷細(xì)胞。替諾福韋酯導(dǎo)致SH-SY5Y細(xì)胞和神經(jīng)元細(xì)胞的形態(tài)發(fā)生改變，具體變現(xiàn)為染色質(zhì)凝聚，細(xì)胞核濃縮和邊緣化，出現(xiàn)凋亡小體等細(xì)胞凋亡的表現(xiàn)特征；TUNEL法和Annexin V/PI標(biāo)記染色檢測(cè)顯示替諾福韋酯（10umol/L、20umol/L、40umol/L）處理72h細(xì)胞后，細(xì)胞的凋亡率與對(duì)照組相比明顯升高（P＜0.01）；細(xì)

4、胞的氧化和抗氧化之間的相關(guān)物質(zhì)或酶發(fā)生變化，細(xì)胞內(nèi)ROS和MDA的量增加，Caspase-3活化也明顯升高（P＜0.01）。小鼠腦片神經(jīng)細(xì)胞經(jīng)10umol/L、20umol/L、40umol/L替諾福韋酯處理72h后出現(xiàn)大量神經(jīng)細(xì)胞凋亡，且呈濃度依賴性（P＜0.01）。
　　結(jié)論:
　　1.替諾福韋酯作用于SH-SY5Y細(xì)胞和神經(jīng)元細(xì)胞降低細(xì)胞的存活率，且使LDH水平升高，說明替諾福韋酯對(duì)神經(jīng)具有明顯毒性。
　　2.替