陽離子脂質(zhì)體作為基因載體的初步研究.pdf

1、為了能制備出轉(zhuǎn)染效率高、細(xì)胞毒性小的基因載體,本文對(duì)非磁性及磁性陽離子脂質(zhì)體作為基因載體進(jìn)行了初步研究. 陽離子脂質(zhì)體的轉(zhuǎn)染效率和細(xì)胞毒性主要取決于陽離子脂質(zhì)體中陽離子脂質(zhì)分子.本文以BOP為偶聯(lián)劑,通過柱層析分離提純,成功合成了三種陽離子脂質(zhì)分子膽酸/賴氨酸一代偶聯(lián)物(CA-Lys)、膽酸/懶氨酸一代偶聯(lián)物(CA-Lys-Lys<,2>)及十八胺/賴氨酸偶聯(lián)物(OA-Lys).<'1>HNMR、MS分析表明,各產(chǎn)物的結(jié)構(gòu)與所

2、設(shè)計(jì)的目標(biāo)分子的結(jié)構(gòu)是一致的. 在此基礎(chǔ)上,以上述三種陽離子脂質(zhì)為原料,制備了一系列的陽離子脂質(zhì)體和磁性陽離子脂質(zhì)體,并且對(duì)其形貌、粒徑、Zeta電位、與DNA的相互作用以及細(xì)胞毒性進(jìn)行了測(cè)試.TEM和粒徑分析表明,三種陽離子脂質(zhì)體和磁性陽離子脂質(zhì)體的形貌都呈球形,平均粒徑在110-140nm之間.Zeta電位測(cè)試表明,CA-Lys、CA-Lys-Lys<,2>及OA-Lys的加入能使脂質(zhì)體的表面帶正電.凝膠電泳分析表明,CA

3、-Lys和OA-Lys兩種陽離子脂質(zhì)體在N/P為5:1時(shí),能和DNA形成復(fù)合物,但不完全,CA-Lys-Lys<,2>陽離子脂質(zhì)體在N/P為2:1時(shí),能和DNA完全形成穩(wěn)定的復(fù)合物.MTT實(shí)驗(yàn)表明,CA-Lys、CA-Lys-Lys<,2>和OA-Lys是毒性較小的陽離子脂質(zhì)分子. 陽離子脂質(zhì)體的毒性主要來自于小分子陽離子脂質(zhì)分子.為了減小毒性,本文還采用了生物相容性好的陽離子大分子殼聚糖(CS)及其衍生物氧羧甲基殼聚糖(OC

4、M-CS)、N-16烷基殼聚糖(16-CS)和N-賴氨酸殼聚糖(Lys-CS)對(duì)脂質(zhì)體和磁性脂質(zhì)體進(jìn)行表面改性,從而得到陽離子脂質(zhì)體和磁性陽離子脂質(zhì)體.CS、OCM-CS、16-CS和Lys-CS表面改性的脂質(zhì)體和磁性脂質(zhì)體的粒徑有所增加,表面電性由負(fù)電變?yōu)檎?凝膠電泳分析表明,CS、OCM-CS和16-CS表面改性的脂質(zhì)體與DNA質(zhì)量比為10:1時(shí)能形成穩(wěn)定的復(fù)合物,Lys-CS表面改性的脂質(zhì)體與DNA質(zhì)量比為2:1時(shí)能形成穩(wěn)定的復(fù)