以金屬離子梯度為載藥動力的米托蒽醌脂質(zhì)體的制備及體內(nèi)外行為研究.pdf

1、目的:米托蒽醌(mitoxantrone,MIT)是一種蒽環(huán)類抗生素,于1979年首先由美國的Murdock和Leberle實驗室合成,目前已獲得美國FDA和歐盟的共同批準,可用于治療急性非淋巴細胞白血病、前列腺癌、惡性淋巴瘤及乳腺癌等。MIT于1991年在我國上市。目前市場上提供的有注射用鹽酸米托蒽醌、鹽酸米托蒽醌注射液等。然而米托蒽醌在應用中存在某些較嚴重的不良反應,如心臟毒性、骨髓抑制和繼發(fā)性髓性白血病,這大大限制了它的應用。

2、r>　　 脂質(zhì)體(Liposomes)是將藥物包封于類脂質(zhì)雙分子層中而形成的微型囊泡體,由于其可以定向釋放藥物,所以屬于靶向給藥系統(tǒng)(Targetingdrug delivery system)的一種新劑型。其進入人體后主要被網(wǎng)狀內(nèi)皮系統(tǒng)吞噬,從而改變被包封藥物的體內(nèi)分布,使藥物主要在肝、脾、肺和骨骼等組織器官中積蓄,從而提高藥物的治療指數(shù),減少藥物的治療劑量,降低藥物的毒性。
　　 基于以上考慮,本研究以金屬離子梯度法為載藥

3、動力制備MIT脂質(zhì)體,以期使其達到靶向、增效、減毒的作用。
　　 方法:在預試驗的基礎(chǔ)上初步確定米托蒽醌脂質(zhì)體的制備方法:首先制備以銅離子為內(nèi)相的空白脂質(zhì)體,然后通過柱透析法置換外相溶液,最后將藥物與空白脂質(zhì)體溶液混合孵育,得到米托蒽醌脂質(zhì)體。
　　 以包封率為指標,通過單因素試驗和正交試驗設計優(yōu)化脂質(zhì)體的處方工藝,考察了不同內(nèi)相溶液、藥物與磷脂質(zhì)量比、孵育溫度、孵育時間等對脂質(zhì)體的影響,最終確定米托蒽醌脂質(zhì)體的最佳處方

4、。
　　 對制備得到的米托蒽醌脂質(zhì)體進行了質(zhì)量研究,主要包括其外觀、pH值、滲透壓、粒徑分布、包封率、體外釋放率、溶血卵磷脂、含量、有關(guān)物質(zhì)等指標的測定。并且進行了米托蒽醌脂質(zhì)體的影響因素試驗和六個月長期穩(wěn)定性試驗。
　　 選用KM小鼠作為動物模型,采用高效液相色譜法分別對米托蒽醌溶液和脂質(zhì)體進行體內(nèi)藥代動力學研究。液相條件:色譜柱:Diamonsil C18,250×4.6 mm,5μm；預柱:EasyGuard C1

5、8,10×4.0 mm；乙腈:庚烷磺酸鈉緩沖液(含有6.0 g/L庚烷磺酸鈉,9.0 ml/L冰醋酸的水溶液)30:70為流動相；紫外檢測器波長為650 nm；柱溫:25℃；檢測器溫度:40℃；流速:1 ml/min；進樣量為20μl。采用DAS2.0軟件進行結(jié)果處理,計算小鼠體內(nèi)各種藥動學參數(shù),進行靶向性評價。
　　 選用小鼠L1210腹水瘤模型考察游離米托蒽醌溶液和米托蒽醌脂質(zhì)體的抗腫瘤療效。將BDF1小鼠腹腔接種L1210

6、腫瘤細胞,24小時后尾靜脈注射給藥?？疾煨∈蟠婊詈腕w重變化情況,以動物平均生存時間(MeanSurvival Time)、中位生存時間(Median Survival Time,MST)和生命延長率(ILS)來評價藥物的治療效果；以動物體重的降低來評價藥物的毒性。
　　 結(jié)果:使用銅離子梯度法制備的米托蒽醌脂質(zhì)體具有較高的包封率(>95％),且重現(xiàn)性良好。通過試驗設計確定的最佳處方工藝為:氫化大豆卵磷脂200mg,膽固醇66mg

7、,米托蒽醌20mg,0.3 mol/L硫酸銅三乙胺溶液為內(nèi)相,孵育溫度60℃,孵育時間30分鐘。
　　 質(zhì)量研究結(jié)果顯示:三批米托蒽醌脂質(zhì)體的平均檢測結(jié)果如下:pH值為7.48；滲透壓為309 mOsmol/Kg；平均粒徑為99.98nm；包封率為95.25％；8小時體外釋放率為29.4％；溶血卵磷脂小于1.0 mg/ml；標示含量100.6％；單個最大雜質(zhì)0.38％,總雜質(zhì)0.74％。
　　 穩(wěn)定性結(jié)果顯示:脂質(zhì)體在2

8、5℃條件下貯存10天,出現(xiàn)明顯的渾濁沉淀；在4℃條件下貯存6個月,外觀性狀良好,粒度、包封率、溶血磷脂、含量沒有明顯變化,有關(guān)物質(zhì)略有增加,但都在限度內(nèi)。說明脂質(zhì)體在冷藏條件下保存時穩(wěn)定性較好。
　　 藥動學實驗表明:米托蒽醌游離藥物溶液和脂質(zhì)體的血漿藥代動力學存在顯著差異,游離藥物組的消除半衰期小于30分鐘,脂質(zhì)體組的消除半衰期為69小時,說明制成脂質(zhì)體后米托蒽醌在小鼠體內(nèi)的循環(huán)時間大大延長。脂質(zhì)體組AUC為728.715μg

9、·h·ml-1,游離藥物組AUC為0.364μg·h·ml-1,說明藥物制成脂質(zhì)體后,有利于提高藥物療效。
　　 藥效學實驗結(jié)果表明:與空白對照組相比,游離藥物組和脂質(zhì)體組均顯著延長了荷瘤鼠的生存時間(p<0.01),且游離藥物組較脂質(zhì)體組延長的時間更長,藥效更好。但是在體重下降的比較中可見,游離藥物組的動物體重下降較脂質(zhì)體組大,這表明了米托蒽醌脂質(zhì)體具有減毒作用。
　　 結(jié)論:以氫化大豆卵磷脂、膽固醇為主要材料,采用銅