青蒿琥酯對(duì)大鼠小腸移植急性排斥反應(yīng)的影響及機(jī)制研究.pdf

1、目的：1、掌握同種異體大鼠節(jié)段性異位小腸移植模型的建立。 2、探討血清IL-2、IFN-γ的表達(dá)和定量分析在大鼠小腸移植急性排斥反應(yīng)過程中的意義及其診斷價(jià)值。 3、研究青蒿琥酯(Artesunate)對(duì)大鼠小腸移植急性排斥反應(yīng)中的影響及其作用機(jī)理。 方法 1、選用供體封閉群成年雄性Wistar 大鼠和受體近交系F344/N 大鼠進(jìn)行節(jié)段性異位小腸移植。隨機(jī)分為4 組，對(duì)照組6 只，同、異基因移植組及異基因

2、移植+青蒿琥酯治療組各18只：①對(duì)照組：F344/N 大鼠僅作腹部開關(guān)及左腎切除術(shù)。②同基因移植組：供受體均為F344/N 大鼠。③異基因移植組：供體為Wistar 大鼠，受體為F344/N 大鼠。④青蒿琥酯處理組：供體為Wistar 大鼠，受體為F344/N 大鼠。移植術(shù)前后7 天給予青蒿琥酯60mg/kg/d，腹腔注射。 2、模型建立與取材：模型建立采用黎介壽等的方法。供體取腹部大十字切口入腹，供腸取自屈氏韌帶下1 cm 處

3、空腸，長(zhǎng)約7~10cm。受體動(dòng)脈吻合采用將供體帶腸系膜上動(dòng)脈的腹主動(dòng)脈段和受體的腹主動(dòng)脈端側(cè)吻合，靜脈吻合采用供體門靜脈與受體左腎靜脈cuff 套管法吻合，移植腸兩端從左側(cè)腹壁分別切口拖出造口。于術(shù)后第3，5，7 天取各組動(dòng)物6 只處死后行移植腸標(biāo)本病理組織學(xué)檢查，同時(shí)采血應(yīng)用ELISA 法檢測(cè)其血清中IL-2、IFN-γ的表達(dá)水平。 3、組織病理檢查：取對(duì)照組及各小腸移植組術(shù)后3、5、7天移植腸標(biāo)本用4％多聚甲醛固定，HE 染

4、色，顯微鏡下觀察，確定排斥反應(yīng)的發(fā)生及強(qiáng)度。 4、血清ELISA 法檢測(cè)：各組動(dòng)物采用斷頭采血分離出血清，應(yīng)用武漢博士德公司的IL-2、IFN-γELISA Kits 檢測(cè)術(shù)前及各組動(dòng)物術(shù)后3、5、7 天血清IL-2 及IFN-γ水平。 結(jié)果 1、熟練掌握了大鼠節(jié)段性小腸移植模型的建立。觀察顯示：同基因移植組術(shù)后無明顯排斥反應(yīng)，異基因移植組出現(xiàn)移植排斥反應(yīng)并且反應(yīng)程度隨時(shí)間增加而逐漸加重，治療組排斥反應(yīng)出現(xiàn)較晚、

5、反應(yīng)程度較輕。 2、病理組織學(xué)表現(xiàn)：異基因移植組術(shù)后3、5、7 天病理組織學(xué)檢查顯示分別符合輕、中、重度排斥反應(yīng)，同基因移植組標(biāo)本無明顯排斥征象，青蒿琥酯處理組部分標(biāo)本術(shù)后7 天有輕度排斥表現(xiàn)，但出現(xiàn)較晚、程度較輕。 3、血清IL-2 水平：異基因移植組術(shù)后第3 天IL-2 水平即明顯升高，第5 天達(dá)到高峰，第7 天仍高于正常水平，與其余幾組比較有明顯差異(P<0.01)；對(duì)照組、同基因移植組和治療組與異基因移植組比較，

6、血清IL-2 水平較低，均無高峰出現(xiàn)；治療組和同基因移植組相比IL-2 水平偏高，但無顯著性差異(P>0.05)。 4、血清IFN- γ水平：異基因移植組血清IFN-γ水平緩慢升高，但明顯高于其余幾組(P<0.05)，第7 天升高幅度最為明顯。同基因移植組與對(duì)照組無明顯差異(P>0.05)。治療組血清IFN-γ水平高于同基因移植組(P<0.05)。 結(jié)論： 1、細(xì)胞因子IL-2、IFN-γ在大鼠小腸移植急性排斥反