長春新堿周期聯合小劑量環(huán)磷酰胺對SLE患者B淋巴細胞亞型及BAFF的影響.pdf

1、【背景】
　　系統性紅斑狼瘡（SystemicLupusErythmatosus,SLE）是由多種自身抗體及免疫復合物引起的累及多系統、多器官的自身免疫性疾病。迄今為止，仍缺乏特異的治療手段，糖皮質激素及免疫抑制劑仍然是其主要的治療藥物。由于疾病的異質性、病情活動性評估的多樣性以及傳統治療方案副作用大不能耐受的現狀，使得我們迫切的需要探索SLE治療新的理念。我科借鑒聯合化療藥物治療淋巴瘤的成功經驗，依據細胞增殖動力學原理選用周期特

2、異性藥物——長春新堿(Vincristine,VCR)聯合周期非特異性藥物——環(huán)磷酰胺（Cyclophosphamide,CTX）治療SLE，經過十多年的臨床及實驗室證實，該方案治療SLE具有較好的療效和較少的副作用，但其具體的作用機制仍不明確。
　　盡管SLE病因仍不明確，但有大量的研究均證實，在SLE患者的腎臟和皮膚組織中可見大量活化T淋巴細胞浸潤，且SLE患者中存在自身反應性B細胞過度活化以及大量自身抗體的產生。這充分表明，

3、T、B淋巴細胞在SLE的發(fā)病中起著重要的作用。有足夠證據顯示SLE患者中T、B淋巴細胞數量及功能均發(fā)生變化，但目前尚未形成一致看法?？赡苁怯捎赥、B淋巴細胞是一群較為復雜的細胞，可以分化為許多亞型，并且在疾病中所起的作用也不同，尤其，B淋巴細胞的異常增殖和活化在SLE的發(fā)病中起著舉足輕重的作用。所以我們推測認為，在SLE的不同活動期，B淋巴細胞可以分化為不同的亞型，導致疾病的發(fā)生、發(fā)展。而通過調節(jié)B淋巴細胞的增殖及分化功能可能是VCR周

4、期聯合小劑量CTX治療SLE的主要機制之一，為此我們設立了該項研究。
　　【目的】
　　（1）明確T、B淋巴細胞亞型在SLE發(fā)病中的作用及其意義；
　　（2）探討VCR周期聯合小劑量CTX治療SLE對T、B淋巴細胞亞型的影響；
　?。?）進一步明確通過調節(jié)B淋巴細胞的分化和增殖功能是否是VCR周期聯合小劑量CTX治療SLE的重要機制之一。
　　【方法】
　　選取2011年6月至2013年1月在山西醫(yī)科

5、大學第二醫(yī)院風濕科就診SLE患者28例，診斷均符合1997年修訂的美國風濕病學會（AmericanCollegeofRheumatology,ACR）分類標準。簽署知情同意書。收集SLE患者一般情況和臨床資料，根據SLE疾病活動指數（systemiclupuserythematosusdiseaseactivityindex,SLEDAI）積分評估疾病的活動性。同時選取正常對照組14名，均不符合SLE診斷標準；非妊娠及哺乳期婦女；無其他

6、重大疾病史；未長期應用激素或免疫抑制劑；無其它自身免疫性疾病。試驗在獲得研究對象知情同意后，抽取血樣標本。
　　采用流式細胞術（FlowCytometry,FCM）檢測入選的SLE患者及健康對照者外周血CD4+T、CD8+T、CD19+B、CD27+B、CD138+B淋巴細胞的百分數。采用酶聯免疫吸附試驗（Enzyme-LinkedImmunosorbentAssay,ELISA）方法檢測試驗者血清BAFF水平。采用實時熒光定量聚

7、合酶鏈反應（Real-timeQuantitativePolymeaseChainReaction,RT-PCR）方法檢測試驗者外周血BAFFmRNA的表達水平。
　　采用SPSS17.0統計軟件分析。
　　【結果】
　　1.SLE活動期患者基線水平T、B淋巴細胞及其亞型比例的變化
　?。?）流式細胞術檢測CD4+T淋巴細胞比例顯示SLE活動期患者與正常人分別為（33.74±7.56）％和（40.93±6.12）

8、%，兩組比較差異無統計學意義(P＞0.05)。
　?。?）流式細胞術檢測CD8+T淋巴細胞比例顯示SLE活動期患者與正常人分別為（31.95±8.01）%和（27.79±6.59）%，兩組比較差異無統計學意義(P＞0.05)。
　?。?）流式細胞術檢測CD19+B淋巴細胞比例顯示SLE活動期患者與正常人分別為（20.18±5.09）%和（12.21±3.83）%，兩組比較差異有統計學意義(P=0.011)。CD19+B淋巴細

9、胞比例與SLEDAI評分呈正相關（P=0.019）。
　?。?）流式細胞術檢測CD27+B淋巴細胞比例顯示SLE活動期患者與正常人分別為（40.31±18.94）%和（31.54±4.46）%，兩組比較差異無統計學意義(P＞0.05)。
　?。?）流式細胞術檢測CD138+B淋巴細胞比例顯示SLE活動期患者與正常人分別為（2.24±1.15）%和（1.00±0.76）%，兩組比較差異有統計學意義(P=0.022)。CD138

10、+B淋巴細胞比例與SLEDAI評分呈正相關（P=0.001）。
　　2.VCR聯合小劑量CTX治療后對T、B淋巴細胞亞型的影響
　　（1）流式細胞術檢測CD4+T淋巴細胞比例顯示SLE活動期患者與緩解期患者分別為（33.74±7.56）%和（33.00±11.02）%，兩組比較差異無統計學意義(P＞0.05)。
　　（2）流式細胞術檢測CD8+T淋巴細胞比例顯示SLE活動期患者與緩解期患者分別為（31.95±8.01）

11、%和（39.55±11.54）%，兩組比較差異有統計學意義(P=0.018)。
　?。?）流式細胞術檢測CD19+B淋巴細胞比例顯示SLE活動期患者與緩解期患者分別為（20.18±5.09）%和（11.95±6.88）%，兩組比較差異有統計學意義(P=0.007)。
　?。?）流式細胞術檢測CD27+B淋巴細胞比例顯示SLE活動期患者與緩解期患者分別為（40.31±18.94）%和（35.23±17.24）%，兩組比較差異無

12、統計學意義(P＞0.05)。
　?。?）流式細胞術檢測CD138+B淋巴細胞比例顯示SLE活動期患者與緩解期患者分別為（2.24±1.15）%和（0.81±0.72）%，兩組比較差異有統計學意義(P=0.002)。
　　3.VCR周期聯合小劑量CTX治療前后與健康對照組的血清BAFF以及PBMCBAFFmRNA表達水平比較
　　SLE活動期患者血清BAFF水平、PBMCBAFFmRNA表達水平與正常對照組相比差異有統計

13、學意義（P＜0.05），SLE活動期患者血清BAFF水平、PBMCBAFFmRNA表達水平與SLE緩解期患者相比差異有統計學意義（P＜0.05），SLE緩解期患者血清BAFF水平與健康對照組相比差異有統計學意義（P＜0.05）。
　　【結論】
　　1.SLE活動期患者T、B淋巴細胞及其亞型比例發(fā)生明顯變化，且B淋巴細胞亞型變化與疾病活動性相關，聯合檢測T、B淋巴細胞數量及比例，可以評估SLE患者病情的活動性并指導治療。