miR-3065-5p和miR-1307-5p在肝癌細(xì)胞中的功能研究.pdf

1、肝細(xì)胞癌(Hepatocellular carcinoma，HCC)是一種常見的惡性腫瘤，多發(fā)于成人，肝癌的發(fā)生、發(fā)展和轉(zhuǎn)移是一個(gè)復(fù)雜的過程，受多個(gè)因子和基因的調(diào)節(jié)。微小核糖核酸RNA(MicroRNA，miRNA)是一類長度在19-24個(gè)核苷酸范圍內(nèi)的內(nèi)源性非編碼RNA，miRNA能夠通過與靶基因mRNA3' UTR互補(bǔ)結(jié)合來抑制翻譯或者促進(jìn)mRNA降解，從而調(diào)控相關(guān)基因的表達(dá)。大量研究報(bào)道稱miRNA在許多腫瘤細(xì)胞中都存在差異性表達(dá)

2、，并且在腫瘤的發(fā)生發(fā)展中都可能發(fā)揮著重要的作用。實(shí)驗(yàn)室前期的研究發(fā)現(xiàn)一定濃度的臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞(Umbilicalcord-derived mesenchymal stem cells，UC-MSCs)條件培養(yǎng)基能夠抑制肝癌細(xì)胞HepG2的增殖，并且通過高通量測序技術(shù)，分析了UC-MSCs條件培養(yǎng)基共培養(yǎng)后HepG2 miRNAs的差異表達(dá)譜，找到了一些可能相關(guān)的miRNAs。其中miR-3065-5p和miR-1307-5p在UC-M

3、SCs條件培養(yǎng)基處理HepG2后表達(dá)水平顯著上調(diào)。
　　本研究通過qRT-PCR檢測了三種肝癌細(xì)胞系(HepG2、MHCC97-L、MHCC87-H)和正常肝細(xì)胞系L02中miR-3065-5p的表達(dá)是否存在差異;結(jié)果顯示，相較正常肝細(xì)胞L02，miR-3065-5p在肝癌細(xì)胞系中的表達(dá)明顯下調(diào)，接下來我們通過體外合成miR-3065-5p質(zhì)粒轉(zhuǎn)染三種肝癌細(xì)胞，結(jié)果發(fā)現(xiàn)過表達(dá)miR-3065-5p能夠顯著抑制三種肝癌細(xì)胞的增殖、侵

4、襲、克隆形成能力。此外，我們通過生物信息學(xué)預(yù)測到SATB1可能是miR-3065-5p的相關(guān)靶基因，通過雙熒光素酶報(bào)告基因?qū)嶒?yàn)進(jìn)一步檢測了預(yù)測的可靠性，實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示SATB1與miR-3065-5p存在互補(bǔ)結(jié)合位點(diǎn)。qRT-PCR與Western blot結(jié)果顯示過表達(dá)的miR-3065-5p能夠顯著抑制SATB1表達(dá)水平。最后通過體外合成siRNA干擾SATB1在肝癌細(xì)胞中的表達(dá)，結(jié)果顯示，干擾SATB1后也能顯著抑制肝癌細(xì)胞的增殖，