mir-885-5p在腫瘤生長和轉(zhuǎn)移中作用機制的研究.pdf

1、第一部分、miR-885-5p在原發(fā)性肝癌轉(zhuǎn)移中作用機制的研究
　　背景:目前，肝癌是世界第六大腫瘤，在我國致死率位居第三。由于肝癌患者早期癥狀不是很明顯，很多肝癌患者發(fā)現(xiàn)一般為晚期。肝癌對化療表現(xiàn)為較強的耐受性。所以探索有效的生物標志物和生物治療靶點對臨床治療肝癌具有重要意義。
　　miR-885-5p是由miR-885的5'端剪切而成，其基因座位于3p25.3。我們的前期研究發(fā)現(xiàn)，在肝硬化病人的血清中miR-885-5p

2、的水平高于原發(fā)性肝癌病人和正常人。隨后也有研究發(fā)現(xiàn)miR-885-5p可以抑制惡性膠質(zhì)瘤和神經(jīng)母細胞瘤的轉(zhuǎn)移。而miR-885-5p在肝癌轉(zhuǎn)移中的作用還未見報道。所以，本文以miR-885-5p為研究對象，通過各種實驗手段，闡明了miR-885-5p在肝癌轉(zhuǎn)移中的作用以及下游分子機制，為肝癌的臨床治療提供有力的理論基礎(chǔ)。
　　方法:
　　1.我們運用原位雜交技術(shù)（In situ hybridization）和實時熒光定量PC

3、R(Real-time qPCR)的方法檢測miR-885-5p在不同分期的肝癌組織和不同惡性程度的肝癌細胞系中的表達;
　　2.我們運用原位雜交技術(shù)檢測來自55位病人的肝癌組織中的miR-885-5p的表達并作生存率分析;
　　3.我們在低表達miR-885-5p的肝癌細胞系HCCLM3和SK-Hep-1中過表達miR-885-5p，運用Transwell和劃痕實驗檢測miR-885-5p對細胞系遷移和浸潤的影響;在高表達

4、miR-885-5p的HepG2細胞系中沉默miR-885-5p，觀察其對肝癌生長的影響;
　　4.我們建立過表達miR-885-5p的肝癌原位成瘤模型，觀察miR-885-5p體內(nèi)對肝癌轉(zhuǎn)移和對小鼠生存期的影響;并且建立SK-Hep-1細胞的皮下成瘤模型，瘤內(nèi)注射miR-885-5p的類似物，觀察對腫瘤生長的影響;
　　5.我們使用生物信息學(xué)的方法預(yù)測miR-885-5p的靶基因，然后利用雙熒光報告分析進行驗證;用West

5、ern Blot的方法檢測靶基因?qū)ο掠涡盘柾返鞍妆磉_的影響。
　　結(jié)果：
　　1.miR-885-5p在分期為T2N0M0的肝癌組織中的表達高于T3N0M0，在肝癌細胞系中，miR-885-5p在轉(zhuǎn)移能力高的細胞系中低表達，在沒有轉(zhuǎn)移能力的細胞系中高表達;
　　2.miR-885-5p的表達與肝癌病人的預(yù)后呈正相關(guān);
　　3.過表達miR-885-5p可以在體外抑制肝癌細胞系HCCLM3和SK-Hep-1的遷移

6、和浸潤;沉默miR-885-5p后可以促進HepG2細胞的增殖;
　　4.過表達miR-885-5p可以在體內(nèi)抑制肝癌的轉(zhuǎn)移，并與小鼠的生存期呈正相關(guān)，瘤內(nèi)注射miR-885-5p的類似物發(fā)現(xiàn)可以抑制腫瘤的生長并且促進其壞死;
　　5.miR-885-5p直接結(jié)合β-catenin和TCF4的3'UTR區(qū)，抑制其表達;進一步抑制了Wnt/β-catenin信號通路的活性以及下游蛋白的表達。
　　結(jié)論:
　　1.m

7、iR-885-5p的表達與肝癌的臨床分期呈負相關(guān)，與肝癌病人的預(yù)后呈正相關(guān);
　　2.miR-885-5p過表達可以在體內(nèi)和體外抑制腫瘤的轉(zhuǎn)移，沉默miR-885-5p后可以促進肝癌的生長;
　　3.miR-885-5p通過抑制β-catenin和TCF4的表達抑制了Wnt/β-catenin信號通路的活性。
　　第二部分、miR-885-5p在彌漫性大B細胞淋巴瘤增殖中作用機制的研究
　　背景:彌漫性大B細胞淋

8、巴瘤（diffuse large B cell lymphoma，DLBCL）是非霍奇金式淋巴瘤的一種，治療困難復(fù)發(fā)率高。新的治療靶點的探索具有重要的臨床意義。表達異常的miRNA在調(diào)控彌漫性大B細胞淋巴瘤發(fā)展中起到重要的作用，目前關(guān)于miR-885-5p如何參與DLBCL的發(fā)展研究還很少。
　　方法:
　　1.本文用Real time qPCR的方法檢測了正常淋巴母細胞和多種DLBCL細胞中的miR-885-5p表達情況;

9、
　　2.我們在OCI-LY3細胞中過表達miR-885-5p，用CCK-8試劑盒檢測miR-885-5p對細胞增殖的作用;
　　3.我們在VAL細胞中沉默miR-885-5p，用CCK-8試劑盒檢測對細胞增殖的作用;
　　4.我們使用生物信息學(xué)的方法預(yù)測miR-885-5p的靶基因，然后利用雙熒報告分析進行驗證;用Western Blot的方法檢測對下游信號通路蛋白表達的影響;
　　5.我們在OCI-LY3和O

10、CI-LY19細胞中沉默細胞溶質(zhì)蛋白1(lymphocytecytosolic protein1，L-plastin)觀察對細胞的增殖的作用。
　　結(jié)果:
　　1.miR-885-5p在DLBCL細胞系中的表達低于正常淋巴母細胞;
　　2.過表達miR-885-5p可以抑制OCI-LY3細胞的增殖;
　　3.沉默miR-885-5p可以促進VAL細胞的增殖；
　　4.miR-885-5p可以直接結(jié)合到L-p