Sox10在腫瘤增殖和轉(zhuǎn)移中的作用及機(jī)制.pdf

1、目的：Sox10是Sox家族的重要成員，我們前期研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)其在多種腫瘤細(xì)胞系中存在高甲基化狀態(tài)伴隨mRNA表達(dá)水平下降，提示Sox10是潛在的抑癌基因，但其表達(dá)下調(diào)在腫瘤中的生物學(xué)功能及具體的分子機(jī)制尚不清楚。
　　方法：建立高效表達(dá)Sox10的慢病毒系統(tǒng)，感染Sox10表達(dá)缺失的KYSE150、HCT116和HCC-LM3細(xì)胞，Realtime-PCR和Western Blot法檢測Sox10基因在腫瘤細(xì)胞系中的表達(dá)。通過 M

2、TS，克隆形成實(shí)驗(yàn)，軟瓊脂形成及裸鼠皮下成瘤實(shí)驗(yàn)檢測上調(diào)Sox10對細(xì)胞增殖的影響；通過TUNEL實(shí)驗(yàn)檢測Sox10對細(xì)胞凋亡的影響；通過劃痕實(shí)驗(yàn)、Transwell實(shí)驗(yàn)和裸鼠皮下-肺轉(zhuǎn)移模型檢測Sox10對腫瘤細(xì)胞轉(zhuǎn)移的影響；并通過免疫共沉淀和熒光素酶報告基因技術(shù)檢測Sox10基因?qū)NT/β-catenin信號通路的調(diào)控作用。
　　結(jié)果：成功構(gòu)建高效表達(dá) Sox10的慢病毒系統(tǒng)，Realtime-PCR和 Western Bl

3、ot法證實(shí)Sox10基因在KYSE150、HCT116和HCC-LM3細(xì)胞中高效表達(dá)。共聚焦熒光顯微鏡顯示Sox10定位于細(xì)胞核。體內(nèi)外實(shí)驗(yàn)表明，與對照組相比，上調(diào)Sox10表達(dá)能顯著抑制腫瘤細(xì)胞的克隆形成能力，體內(nèi)成瘤能力并促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的凋亡。上調(diào)Sox10的表達(dá)水平后能顯著抑制腫瘤細(xì)胞的遷移，侵襲能力及肺轉(zhuǎn)移灶的形成，表明Sox10是重要的抑癌基因。免疫共沉淀證實(shí)Sox10可與β-catenin相互結(jié)合，熒光素酶報告基因顯示Sox1