miR-139-5p與結(jié)腸癌細(xì)胞生物學(xué)功能的關(guān)聯(lián)研究.pdf

1、目的:結(jié)腸癌(ColonCancer)是常見的消化道惡性腫瘤之一，它的發(fā)病率和死亡率呈逐年上升趨勢，在西方國家，結(jié)腸癌的發(fā)病率位于世界第二位，而在我國，它的發(fā)生率和死亡率則位于第四位，目前結(jié)腸癌在其早期診斷、早期治療方面取得了一定的成效，但其預(yù)后及5年生存率仍很低。
　　 本研究通過觀察miR-139-5p的表達(dá)對結(jié)腸癌細(xì)胞增殖、凋亡、細(xì)胞周期、侵襲和遷移的影響，初步探討miR-139-5p在結(jié)腸癌發(fā)展過程中的作用，為結(jié)腸癌的早

2、期篩查、基因的靶向治療以及預(yù)后提供理論依據(jù)。
　　 方法:通過RT-PCR(Real-timePolymeraseChainReaction)分析了95對結(jié)腸癌和癌旁正常組織以及所有的7種人類結(jié)腸癌細(xì)胞中miR-139-5p的表達(dá)水平;采用瞬時轉(zhuǎn)染的方法，將pre-miR-139-5p和pre-miR-Ctrl分別轉(zhuǎn)染到結(jié)腸癌細(xì)胞株中，RT-PCR(Real-timePolymeraseChainReaction)檢測其轉(zhuǎn)染效率

3、;MTT法繪制出細(xì)胞生長曲線，Transwell法檢測細(xì)胞的侵襲和遷移能力，流式細(xì)胞儀對轉(zhuǎn)染的結(jié)腸癌細(xì)胞株進(jìn)行凋亡和細(xì)胞周期分析;最后通過WesternBlot和PCR的方法驗證了與細(xì)胞侵襲、遷移及細(xì)胞凋亡相關(guān)基因的表達(dá)情況。采用T-Ttest方法對分別轉(zhuǎn)染miR-139-5p和miR-Ctrl的結(jié)腸癌細(xì)胞的增殖、侵襲、轉(zhuǎn)移、凋亡、及細(xì)胞周期方面進(jìn)行檢驗和分析。
　　 結(jié)果:1.通過實時定量PCR分析得出，與癌旁正常組織相比，m

4、iR-139-5p在結(jié)腸癌組織中表達(dá)是明顯降低的(P＜0.0001)，miR-139-5p的表達(dá)下調(diào)與結(jié)腸癌的遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移存在著明顯的關(guān)聯(lián)(P=0.031)。同時與正常結(jié)腸細(xì)胞相比，在人類的7種結(jié)腸癌細(xì)胞中miR-139-5p的表達(dá)沉默或者減少。這些揭示了miR-139-5p在結(jié)腸癌中可能是一個潛在的腫瘤抑制因子。
　　 2.細(xì)胞生物學(xué)功能方面，通過細(xì)胞活力測定(MTT)和集落形成實驗，miR-139-5p在結(jié)腸癌細(xì)胞株(DLD1，

5、HCT116，SW1116)中的表達(dá)可以明顯抑制結(jié)腸癌細(xì)胞的生長(P＜0.0001，P=0.0002，P=0.0022)和集落的形成(P＜0.05）。明顯抑制結(jié)腸癌細(xì)胞的生長(P＜0.0001，P=0.0002，P=0.0022)和集落的形成（P＜0.05）。
　　 3.此外，miR-139-5p在DLD1和SW1116中的表達(dá)可以抑制細(xì)胞的侵襲(P=0.0006，P=0.013)和遷移能力(P＜0.0001)，抑制基因VIM(

6、SW1116,P=0.0088),MMP1(DLD1，P=0.0088),MMP7(DLD1P=0.0035,SW1116P=0.0031)和MMP9的表達(dá)。
　　 4.miR-139-5p能夠誘導(dǎo)結(jié)腸癌細(xì)胞DLD1和HCT116的凋亡(P＜0.05)，上調(diào)重要的凋亡相關(guān)基因cleavedcaspase-8和PARP。同時，miR-139-5p能夠引起結(jié)腸癌細(xì)胞周期G0/G1期阻滯(DLD1，HCT116)，通過它可以促進(jìn)G0/

7、G1期重要的調(diào)控因子p21和p27的表達(dá)而得到證實(DLD1P=0.0082,P=0.0036,HCT116P=0.025)。
　　 結(jié)論:1.miR-139-5p在結(jié)腸癌組織和結(jié)腸癌細(xì)胞中的表達(dá)明顯下調(diào)。
　　 2.miR-139-5p通過抑制細(xì)胞增殖、促進(jìn)細(xì)胞凋亡等過程發(fā)揮類似抑癌作用;它通過調(diào)節(jié)細(xì)胞周期重要調(diào)控因子P21和P27的水平阻滯細(xì)胞周期;通過Caspase途徑誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡;通過調(diào)控基質(zhì)金屬蛋白酶，影響細(xì)胞