miR-126穩(wěn)定過表達結(jié)腸癌細胞系的構(gòu)建及其生物學(xué)功能研究.pdf

1、目的： microRNA(以下簡寫為miRNA)，是一類非編碼小分子RNA，在腫瘤的發(fā)生過程中起著十分重要的作用。本課題組前期研究發(fā)現(xiàn)在NGX6轉(zhuǎn)染前后不同轉(zhuǎn)移能力的結(jié)腸癌細胞株中miR-126的表達存在差異，提示miR-126可能與結(jié)腸癌轉(zhuǎn)移有關(guān);亦有研究表明，miR-126與胃癌、肺癌、乳腺癌、結(jié)腸癌等惡性腫瘤密切相關(guān)。本研究將利用穩(wěn)定表達miR-126的結(jié)腸癌細胞系研究miR-126的生物學(xué)功能，并初步驗證數(shù)據(jù)庫預(yù)測的靶基因，以期

2、更深入探討miR-126在結(jié)腸癌發(fā)生發(fā)展過程中發(fā)揮的作用，為結(jié)腸癌的診斷、治療、預(yù)后提供新的靶點。
　　 方法：⑴利用慢病毒載體構(gòu)建miR-126穩(wěn)定過表達的結(jié)腸癌SW480細胞系。⑵研究miR-126過表達對結(jié)腸癌細胞的生物學(xué)功能影響，采用MTT法檢測細胞增殖能力，劃痕實驗及Transwell實驗檢測細胞遷移侵襲能力，流式細胞學(xué)技術(shù)檢測細胞周期及凋亡。⑶Targetscan及Pictar數(shù)據(jù)庫預(yù)測miR-126靶基因有SPRE

3、D1、PLK2、CRK、IRS1、SLC7A5、TOM1，驗證miR-126對其表達的影響。
　　 結(jié)果：①穩(wěn)定過表達miR-126的SW480細胞較對照組升高2.8倍(P＜0.05)。②MTT實驗結(jié)果顯示，miR-126過表達組細胞生長活力在72、96小時較對照組顯著降低。劃痕實驗及Transwell實驗結(jié)果提示miR-126可抑制SW480細胞的遷移侵襲能力。流式細胞分析結(jié)果顯示miR-126能夠增加G1期細胞比例，減少S期

4、細胞比例，抑制其增殖，同時能促進其凋亡。③real-time PCR結(jié)果表明IRS1、SLC7A5、TOM1在miR-126過表達組較對照組表達下降(P＜0.05)，SPRED1、PLK2、CRK在miR-126過表達組較對照組表達上升(P＜0.05)。
　　 結(jié)論：⑴成功構(gòu)建miR-126穩(wěn)定過表達的結(jié)腸癌SW480細胞系。⑵miR-126可抑制結(jié)腸癌SW480細胞的增殖、遷移、侵襲能力并促進其凋亡。⑶在結(jié)腸癌中IRS1、SL