BCL6B在結(jié)腸癌中的表觀失活及其生物學(xué)功能.pdf

1、目的:結(jié)腸癌(colorectal cancer,CRC)作為消化系統(tǒng)常見(jiàn)的惡性腫瘤之一,近年來(lái)其發(fā)病率在我國(guó)呈逐漸上升的趨勢(shì)。結(jié)腸癌的發(fā)病機(jī)制并不清楚,越來(lái)越多的研究表明,抑癌基因因?yàn)閱?dòng)子區(qū)域的高甲基化所導(dǎo)致的表達(dá)缺失或下調(diào),在結(jié)腸癌的發(fā)生和發(fā)展中起了至關(guān)重要作用。有文獻(xiàn)報(bào)道BCL6B通過(guò)啟動(dòng)子區(qū)域的高甲基化而導(dǎo)致表觀失活,在胃癌的發(fā)生發(fā)展中發(fā)揮重要作用,BCL6B甲基化檢測(cè)可作為胃癌診斷的分子標(biāo)志物。但目前BCL6B在結(jié)腸癌中的研

2、究未見(jiàn)報(bào)道。本課題通過(guò)探討B(tài)CL6B啟動(dòng)子區(qū)域的甲基化與結(jié)腸癌的關(guān)系,為結(jié)腸癌的早期診斷提供可檢測(cè)的分子標(biāo)志物,BCL6B的表觀調(diào)控機(jī)制及其在結(jié)腸癌中的生物學(xué)功能研究,為探索結(jié)腸癌的發(fā)病機(jī)制及發(fā)病后的治療提供新的方法。
　　方法:采用甲基化特異性PCR(methylation specific PCR,MSP)檢測(cè)BCL6B在7株結(jié)腸癌細(xì)胞系和102例原發(fā)性結(jié)腸癌組織中BCL6B基因啟動(dòng)子區(qū)域的甲基化狀況;采用半定量RT-PCR分

3、析5-雜氮-2'-脫氧胞(5-Aza-2'-deoxycytidine,5-Aza)處理前后結(jié)腸癌細(xì)胞系中BCL6B mRNA的表達(dá)情況;將BCL6B甲基化結(jié)果和結(jié)腸癌臨床病理學(xué)特點(diǎn)進(jìn)行相關(guān)性的統(tǒng)計(jì)分析;免疫組織化學(xué)染色用于檢測(cè)32對(duì)石蠟包塊的結(jié)腸癌組織和配對(duì)癌旁組織的BCL6B蛋白表達(dá)水平,探討其和甲基化的相關(guān)性;瞬時(shí)轉(zhuǎn)染BCL6B后,通過(guò)細(xì)胞周期和凋亡檢測(cè),細(xì)胞增殖和克隆形成實(shí)驗(yàn)探討B(tài)CL6B對(duì)結(jié)腸癌的作用。
　　結(jié)果:7株結(jié)

4、腸癌細(xì)胞系RKO、HT-29、DLD1、LOVO、HCT116、SW480、SW620的MSP結(jié)果顯示其啟動(dòng)子區(qū)呈完全或部分甲基化,BCL6B mRNA的表達(dá)也相應(yīng)出現(xiàn)缺失或下調(diào),102例原發(fā)性結(jié)腸癌標(biāo)本中,BCL6B啟動(dòng)子區(qū)的甲基化率為79.4％(81/102),而7例正常結(jié)腸組織中BCL6B均無(wú)甲基化,5-Aza處理后7株結(jié)腸癌細(xì)胞系BCL6B恢復(fù)表達(dá)或表達(dá)上調(diào),通過(guò)將免疫組化染色評(píng)分和MSP結(jié)果進(jìn)行相關(guān)性分析發(fā)現(xiàn),BCL6B甲基化

5、與其蛋白表達(dá)水平負(fù)相關(guān)?；謴?fù)RKO中BCL6B的表達(dá)可引起細(xì)胞G1/S期阻滯,同時(shí)可抑制克隆形成和細(xì)胞增殖,而對(duì)細(xì)胞凋亡無(wú)影響。
　　結(jié)論:本文的研究結(jié)果顯示BCL6B在結(jié)腸癌細(xì)胞系及結(jié)腸癌組織中存在啟動(dòng)子區(qū)異常高甲基化,并且甲基化調(diào)控BCL6B的表達(dá)。BCL6B甲基化與結(jié)腸癌腫瘤TNM分期和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移密切相關(guān),提示BCL6B甲基化可能成為結(jié)腸癌的腫瘤標(biāo)志物和預(yù)后指標(biāo)。BCL6B啟動(dòng)子區(qū)甲基化促進(jìn)細(xì)胞周期和結(jié)腸癌細(xì)胞的增殖,恢復(fù)B