miR-139-5p靶向TGF-β1調(diào)控EMT抑制肝癌細(xì)胞侵襲轉(zhuǎn)移.pdf

1、目的：研究肝癌中miR-139-5P與轉(zhuǎn)化生長因子β1（TGF-β1）之間的表達(dá)關(guān)系，分析TGF-β1是否是miR-139-5P的靶基因，闡明miR-139-5P靶向TGF-β1調(diào)控上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化（EMT）相關(guān)信號通路，抑制肝癌細(xì)胞侵襲轉(zhuǎn)移的分子機(jī)制。
　　方法：首先通過生物信息學(xué)方法，發(fā)現(xiàn)20個miRNAs可能是 TGF-β1的潛在靶miRNAs；進(jìn)一步計算分析后發(fā)現(xiàn)，miR-139-5P是TGF-β1的最佳結(jié)合靶miRNA。在5

2、6例肝癌組織和20例癌旁組織中，通過免疫組化檢測TGF-β1的表達(dá)水平；通過qRT-PCR檢測miR-139-5P的表達(dá)，Western blot檢測TGF-β1的表達(dá)，分析兩者之間的表達(dá)相關(guān)性；在高轉(zhuǎn)移和低轉(zhuǎn)移的肝癌細(xì)胞株中，qRT-PCR檢測miR-139-5P的表達(dá)，Western blot檢測TGF-β1、N-cadherin、Vimentin表達(dá)，分析miR-139-5P和三個蛋白表達(dá)之間的關(guān)系；在重組細(xì)胞株HepG2-miR

3、-139-5p mimics、HepG2-miR-Scramble、HepG2-miR-139-5p-PM、HepG2中，qRT-PCR檢測miR-139-5P的表達(dá)，western blot檢測TGF-β1的表達(dá)，分析miR-139-5P表達(dá)是否與TGF-β1的3` UTR端結(jié)合；Transwell方法檢測miR-139-5P表達(dá)改變后的肝癌重組細(xì)胞系侵襲能力的改變。
　　結(jié)果：（1）生物信息學(xué)方法發(fā)現(xiàn)與TGF-β1結(jié)合的靶mi

4、RNAs有20個；其中，miR-139-5p是與TGF-β1的結(jié)合穩(wěn)定性最高，特異性最好的靶miRNA。
　?。?）肝癌組織中TGF-β1表達(dá)陽性率為80.4％（45/56），癌旁正常肝組織中表達(dá)陽性率為15.0%（3/20），兩者之間的陽性率比較有顯著性差異（P＜0.01）。（3）肝癌組織中miR-139-5p低表達(dá)，而癌旁組織中miR-139-5p高表達(dá)，兩者之間的差異有統(tǒng)計學(xué)（P＜0.01）；肝癌組織中TGF-β1高表達(dá)，癌

5、旁組織中低表達(dá)，兩者之間的差異有統(tǒng)計學(xué)（P＜0.01）。miR-139-5p和TGF-β1表達(dá)之間存在負(fù)相關(guān)。
　?。?）高轉(zhuǎn)移細(xì)胞株MHCC97-H中miR-139-5p低表達(dá)，低轉(zhuǎn)移細(xì)胞株MHCC97-L中miR-139-5p高表達(dá)，兩者之間的表達(dá)差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.01）；高轉(zhuǎn)移細(xì)胞株 MHCC97-H中 TGF-β1、N-cadherin、Vimentin均高表達(dá)，低轉(zhuǎn)移細(xì)胞株MHCC97-L中TGF-β1、N-ca

6、dherin、Vimentin低表達(dá)，三個蛋白的表達(dá)水平在不同轉(zhuǎn)移細(xì)胞系中有顯著性差異（P＜0.01）。
　　（4）HepG2-miR-139-5p mimics細(xì)胞株中miR-139-5p水平表達(dá)增高，而TGF-β1表達(dá)水平下調(diào)（P＜0.05）；而在HepG2-miR-Scramble、HepG2-miR-139-5p-PM、HepG2三個細(xì)胞株中，miR-139-5p表達(dá)水平無明顯差異，TGF-β1表達(dá)水平也沒有明顯差異。mi

7、R-139-5p能和TGF-β1的3`UTR位點結(jié)合。
　?。?）miR-139-5p高表達(dá)細(xì)胞株中侵襲細(xì)胞計數(shù)明顯低于其他三組（P＜0.01），HepG2-miR-Scramble、HepG2-miR-139-5p-PM、HepG2三個細(xì)胞株中 miR-139-5p表達(dá)水平無明顯差異，他們之間侵襲細(xì)胞計數(shù)也無顯著性差異（P＞0.05）。
　　結(jié)論：（1）TGF-β1在肝癌組織中表達(dá)增高，與肝癌發(fā)病有關(guān)。
　?。?）肝