小麥miR2118b-5p的克隆及其功能研究.pdf

1、殺配子染色體(GC)是指在小麥（Triticum aestivum L.）遺傳背景下附加來自山羊草屬(Aegilops Linn.)的某些染色體，這種外源染色體具有優(yōu)先傳遞效應(yīng)，并能誘導(dǎo)其它染色體斷裂和重組，從而產(chǎn)生缺失、易位等染色體結(jié)構(gòu)變異，在小麥的遺傳育種中發(fā)揮著十分重要的作用，但是殺配子染色體的分子作用機(jī)制至今仍不清楚。在前期研究中，通過高用量測(cè)序分析發(fā)現(xiàn)，miR2118b-5p在小麥-殺配子染色體3C單體附加系(CS-3C)花藥

2、里差異表達(dá)。本研究克隆小麥miR2118b-5p前體（MIR2118b-5p），并對(duì)其進(jìn)行功能研究。主要研究結(jié)果如下:
　　1.根據(jù)miRNA前體基因的結(jié)構(gòu)特點(diǎn)，設(shè)計(jì)引物，利用PCR法從小麥基因組克隆獲得MIR2118b-5p基因，對(duì)該前體序列進(jìn)行二級(jí)結(jié)構(gòu)預(yù)測(cè)，可形成頸環(huán)結(jié)構(gòu)。
　　2.成功構(gòu)建了其植物表達(dá)載體，pOx-MIR2118b-5p，含有pUbi啟動(dòng)子，具有潮霉素抗性。
　　3.通過農(nóng)桿菌介導(dǎo)法對(duì)水稻進(jìn)行遺傳

3、轉(zhuǎn)化，獲得潮霉素(Hyg)抗性水稻植株13株。
　　4.通過PCR對(duì)抗性植株進(jìn)行了分子生物學(xué)檢測(cè)，得到6株轉(zhuǎn)MIR2118b-5p基因水稻。利用Stem-loop qRT-PCR檢測(cè)了MIR2118b-5p成熟體在轉(zhuǎn)基因植株中表達(dá)量，結(jié)果表明，有3株轉(zhuǎn)MIR2118b-5p基因植株miR2118b-5p表達(dá)量明顯提高。
　　5.對(duì)預(yù)測(cè)獲得的靶基因OsSA UR36進(jìn)行了表達(dá)分析。結(jié)果表明，轉(zhuǎn)基因水稻的OsSAUR36表達(dá)量明