番茄Sly-miR393的克隆、鑒定及其功能研究.pdf

1、MicroRNA(miRNA)是一類內(nèi)源性的、長(zhǎng)度為21～24個(gè)堿基的小分子非編碼RNA，它通過(guò)對(duì)靶基因mRNA的降解或者抑制其翻譯等方式，在轉(zhuǎn)錄后水平上特異調(diào)控靶基因的表達(dá)。miR393是植物中高度保守的miRNA，通過(guò)特異地調(diào)節(jié)生長(zhǎng)素受體家族成員(TIR，AFB1，AFB2和AFB3)，在生長(zhǎng)素信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)過(guò)程中發(fā)揮著重要的調(diào)控作用。
　　 本文以番茄為研究材料，分離和鑒定了Sly-miR393及其靶基因，分析了它們?cè)诜阎械臅r(shí)

2、空特異表達(dá)模式。研究了番茄中Sly-miR393對(duì)靶基因的調(diào)控方式、對(duì)生長(zhǎng)素反應(yīng)等，為闡明Sly-miR393在番茄的生長(zhǎng)素信號(hào)途徑中的調(diào)控作用具有重要意義。本研究主要取得以下研究結(jié)果：
　　 1、通過(guò)生物信息學(xué)方法，在番茄基因組數(shù)據(jù)庫(kù)中篩選到能夠形成完整莖環(huán)結(jié)構(gòu)的Sly-miR393前體序列。以基因組DNA為模板，克隆了番茄Sly-miR393前體，并構(gòu)建了以CaMV35S為啟動(dòng)子的超表達(dá)載體，即pLP35S-pre-Slym

3、iR393。
　　 2、采用農(nóng)桿菌介導(dǎo)的番茄遺傳轉(zhuǎn)化法，獲得了轉(zhuǎn)基因番茄植株，并且通過(guò)RT-PCR技術(shù)驗(yàn)證了sLY-miR393在番茄中超表達(dá)。
　　 3、Sly-miR393的表達(dá)模式表明，莖中的表達(dá)豐度最強(qiáng)，花中較強(qiáng)，根、葉、花蕾中表達(dá)溫和。果實(shí)中表達(dá)豐度較低，并且隨著果實(shí)后期成熟，表達(dá)水平逐漸下降。
　　 4、根據(jù)miR393與其靶標(biāo)mRNA之間的序列互補(bǔ)性，在番茄基因組數(shù)據(jù)庫(kù)中尋找到三個(gè)生長(zhǎng)素受體同源基因

4、SlTIR，SlTIR1-like1和SlAFB，并且通過(guò)5’RACERT-PCR技術(shù)證實(shí)，在番茄體內(nèi)Sly-miR393對(duì)靶基因SlTIR，SlTIR1-like1和SlAFB的轉(zhuǎn)錄本進(jìn)行剪切降解。
　　 5、利用定量PCR技術(shù)分析了靶基因在不同組織的特異性表達(dá)情況，發(fā)現(xiàn)Sly-miR393的表達(dá)模式與SlTIR1在葉和莖中，SlTIR1-like1在花蕾，SlAFB在花、黃果、葉組織中出現(xiàn)互補(bǔ)的關(guān)系。
　　 6、對(duì)超