番茄miR319c對(duì)灰霉病菌侵染的應(yīng)答及其功能研究.pdf

1、miR319是一種保守的miRNA，已有研究發(fā)現(xiàn)它參與植物的生長(zhǎng)發(fā)育、對(duì)干旱、寒冷及鹽脅迫的應(yīng)答，但在真菌脅迫應(yīng)答方面的研究幾乎沒(méi)有。本實(shí)驗(yàn)旨在利用生物學(xué)實(shí)驗(yàn)方法研究植物miR319c及其靶基因在灰霉菌侵染植物過(guò)程中的生物學(xué)功能。得到的主要實(shí)驗(yàn)結(jié)果總結(jié)如下:(1)RT-qPCR檢測(cè)發(fā)現(xiàn)，miR319c在感染灰霉菌的番茄中表達(dá)下調(diào)，靶基因TCP24和TCP29的表達(dá)上調(diào)，說(shuō)明miR319c可能通過(guò)調(diào)節(jié)靶基因參與番茄葉片對(duì)灰霉菌感染的響應(yīng)。

2、(2)在轉(zhuǎn)基因擬南芥和轉(zhuǎn)基因番茄中，miR319c得到了過(guò)量表達(dá)，相應(yīng)地，其5個(gè)TCP家族成員的靶基因表達(dá)顯著下降。(3)接菌實(shí)驗(yàn)證實(shí)，過(guò)表達(dá)miR319c的轉(zhuǎn)基因擬南芥葉片和轉(zhuǎn)基因番茄葉片沒(méi)有明顯的病斑，臺(tái)盼藍(lán)染色結(jié)果發(fā)現(xiàn)灰霉菌菌絲在過(guò)表達(dá)miR319c的植株相比于各自的野生型明顯受到抑制，說(shuō)明miR319c的過(guò)表達(dá)增強(qiáng)了轉(zhuǎn)基因植株對(duì)灰霉菌的抗性。(4)基于過(guò)表達(dá)miR319c轉(zhuǎn)基因植株表現(xiàn)的抗性，本研究對(duì)茉莉酸(JA)合成和信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)

3、相關(guān)基因、miRNA合成過(guò)程關(guān)鍵基因以及一些脅迫應(yīng)答相關(guān)miRNA的表達(dá)進(jìn)行了RT-qPCR檢測(cè)。其中，JA合成和信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)相關(guān)基因表達(dá)大多數(shù)都呈上調(diào)，可能JA響應(yīng)灰霉菌的誘導(dǎo)從而激活下游相關(guān)防御反應(yīng);另外，實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示植物響應(yīng)脅迫相關(guān)miRNAs的表達(dá)受miR319c過(guò)表達(dá)的影響;miR319c的過(guò)表達(dá)或者灰霉菌的侵染對(duì)miRNA合成途徑主要基因的表達(dá)沒(méi)有明顯的影響。(5)基于RNAi技術(shù)和過(guò)表達(dá)手段，構(gòu)建了miR319靶基因TCP的R