番茄miR319c對灰霉病菌侵染的應答及其功能研究.pdf

1、miR319是一種保守的miRNA，已有研究發(fā)現(xiàn)它參與植物的生長發(fā)育、對干旱、寒冷及鹽脅迫的應答，但在真菌脅迫應答方面的研究幾乎沒有。本實驗旨在利用生物學實驗方法研究植物miR319c及其靶基因在灰霉菌侵染植物過程中的生物學功能。得到的主要實驗結果總結如下:(1)RT-qPCR檢測發(fā)現(xiàn)，miR319c在感染灰霉菌的番茄中表達下調，靶基因TCP24和TCP29的表達上調，說明miR319c可能通過調節(jié)靶基因參與番茄葉片對灰霉菌感染的響應。

2、(2)在轉基因擬南芥和轉基因番茄中，miR319c得到了過量表達，相應地，其5個TCP家族成員的靶基因表達顯著下降。(3)接菌實驗證實，過表達miR319c的轉基因擬南芥葉片和轉基因番茄葉片沒有明顯的病斑，臺盼藍染色結果發(fā)現(xiàn)灰霉菌菌絲在過表達miR319c的植株相比于各自的野生型明顯受到抑制，說明miR319c的過表達增強了轉基因植株對灰霉菌的抗性。(4)基于過表達miR319c轉基因植株表現(xiàn)的抗性，本研究對茉莉酸(JA)合成和信號轉導

3、相關基因、miRNA合成過程關鍵基因以及一些脅迫應答相關miRNA的表達進行了RT-qPCR檢測。其中，JA合成和信號轉導相關基因表達大多數(shù)都呈上調，可能JA響應灰霉菌的誘導從而激活下游相關防御反應;另外，實驗結果顯示植物響應脅迫相關miRNAs的表達受miR319c過表達的影響;miR319c的過表達或者灰霉菌的侵染對miRNA合成途徑主要基因的表達沒有明顯的影響。(5)基于RNAi技術和過表達手段，構建了miR319靶基因TCP的R