番茄灰霉病拮抗菌株的篩選鑒定及其作用機(jī)制研究.pdf

1、番茄灰霉病是一種重要的并原真菌病害，該病害不僅在寄主植物生長(zhǎng)季節(jié)可以發(fā)生，還可以在農(nóng)產(chǎn)品的儲(chǔ)藏期間發(fā)生，因此危害嚴(yán)重。據(jù)報(bào)道一般年份病害的發(fā)生可造成的經(jīng)濟(jì)損失達(dá)20％-30%，嚴(yán)重的年份50%以上甚至絕收?；颐共【菀装l(fā)生變異而產(chǎn)生抗藥性，目前已對(duì)苯丙咪唑類、二甲酰亞胺類、氨基甲酸酯類等多種殺菌劑產(chǎn)生抗性，不僅造成防效的降低，而且導(dǎo)致藥劑使用量不斷加大?；瘜W(xué)藥劑的過度使用，不僅造成農(nóng)產(chǎn)品農(nóng)殘超標(biāo)，危害消費(fèi)者的身體健康，還導(dǎo)致環(huán)境污染，破

2、壞生態(tài)平衡，影響農(nóng)業(yè)的可持續(xù)健康發(fā)展。
　　生物防治是植物病害防治的重要措施之一。生防菌可通過誘導(dǎo)寄主植物抗病性的產(chǎn)生、抑制或拮抗灰霉病菌或同時(shí)對(duì)寄主和病原發(fā)生作用而到達(dá)防治或減輕病害的目的。目前已有木霉菌、枯草芽胞桿菌、沙雷氏菌、鏈霉菌等多種微生物對(duì)灰霉病菌拮抗作用的相關(guān)報(bào)道。生物菌劑或制劑的研發(fā)可以減少化學(xué)農(nóng)藥的使用，從而既能有效防治病害，又可避免化學(xué)農(nóng)藥的使用帶來的負(fù)面效應(yīng)。
　　本實(shí)驗(yàn)從番茄葉片中分離并篩選出對(duì)灰霉病

3、菌具有較高拮抗作用的生防細(xì)菌菌株QBA-3和QBA-5，并對(duì)其進(jìn)行鑒定，研究了菌株的發(fā)酵條件、發(fā)酵濾液的穩(wěn)定性，初步研究了拮抗菌株產(chǎn)生的抑菌活性物質(zhì)對(duì)灰霉病菌的作用方式，以及對(duì)灰霉病的生防效果，得到如下結(jié)果：
　　1.從20份番茄葉片樣品中分離得到得68株細(xì)菌菌株，通過凹玻片孢子萌發(fā)法篩選其中QBA-3和QBA-5菌株對(duì)灰霉菌具有較強(qiáng)的拮抗作用。QBA-3和
　　QBA-5菌株的發(fā)酵菌液機(jī)器濾液均對(duì)灰霉病菌分生孢子的萌發(fā)有抑

4、制作用。因此，將QBA-3和QBA-5菌株作為防治灰霉病的生防細(xì)菌菌株。
　　2.依據(jù)16S rDNA測(cè)序，結(jié)果表明，菌株與假單胞菌屬的序列一致性最高，達(dá)到99%。參照《細(xì)菌系統(tǒng)常見鑒定手冊(cè)》對(duì)菌株進(jìn)行形態(tài)學(xué)特征、生理生化特征的鑒定，鑒定QBA-3為洋蔥假單胞菌菌株，QBA-5為嗜麥芽假單胞菌菌株。
　　3.通過對(duì)菌株發(fā)酵條件的不斷優(yōu)化，結(jié)果表明：在YEPD培養(yǎng)基中，QBA-3菌株的最佳發(fā)酵時(shí)間為4天，溫度為28℃，培養(yǎng)基p

5、H為9，轉(zhuǎn)速為130 rpm，裝樣量為20 mL/100 mL。QBA-5菌株的最佳發(fā)酵時(shí)間為3天，溫度為40℃，培養(yǎng)基pH為9，轉(zhuǎn)速為130 rpm，裝樣量為15 mL/100 mL。
　　4.活性物質(zhì)的穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，QBA-3和QBA-5兩菌株的發(fā)酵濾液對(duì)熱穩(wěn)定，在100℃條件下處理30 min，抑制率均在96%以上。兩菌株發(fā)酵濾液的活性物質(zhì)對(duì)可見光和紫外線較為敏感，隨著處理時(shí)間的延長(zhǎng)，兩個(gè)菌株發(fā)酵濾液的抑菌活性逐漸降低

6、。紫外處理24 h后對(duì)灰霉病菌分生孢子萌發(fā)的抑制率分別為76.1%和60%；可見光處理30d后對(duì)灰霉病菌分生孢子萌發(fā)的抑制率分別為56%和34%。將活性物質(zhì)置于4℃和25℃條件下進(jìn)行貯存，結(jié)果表明，90d后兩個(gè)菌株活性物質(zhì)的抑菌活性均略有降低，但差異不顯著，由此看出該活性物質(zhì)可以長(zhǎng)期貯存。pH對(duì)活性物質(zhì)的影響研究表明，QBA-3菌株產(chǎn)生的活性物質(zhì)在pH為5-11范圍內(nèi)對(duì)灰霉病菌分生孢子萌發(fā)的抑制率均在93%以上，所以對(duì)酸堿穩(wěn)定，而QBA

7、-5相對(duì)耐堿不耐酸,在pH=4時(shí)，抑制率僅為20%。而在pH=10時(shí)抑制率接近于100%。
　　5.菌株對(duì)灰霉病菌作用機(jī)制的研究結(jié)果表明，兩個(gè)菌株對(duì)灰霉病菌分生孢子的萌發(fā)有強(qiáng)烈的抑制作用，并能有效的抑制芽管伸長(zhǎng)及強(qiáng)烈抑制灰霉病菌菌絲的生長(zhǎng)，使灰霉病菌菌絲折疊扭曲畸形，細(xì)胞壁破損甚至消解導(dǎo)致分生孢子破裂死亡和菌絲斷裂。QBA-3和QBA-5對(duì)菌絲生長(zhǎng)的抑制率分別為97.86%和97.03%，而甲硫?乙霉威對(duì)菌絲生長(zhǎng)的抑制率97.68