抗原抗體反應(yīng)

1、第二章,抗原抗體反應(yīng),(antigen – antibody reaction),抗原抗體反應(yīng):指抗原與相應(yīng)抗體之間 所發(fā)生的特異性結(jié)合反應(yīng)。,體內(nèi)：體液免疫應(yīng)答的效應(yīng)作用,體外：各種免疫學(xué)檢測技術(shù),,包括,本章講述的抗原抗體反應(yīng)，主要是指抗原和抗體在體外結(jié)合所表現(xiàn)的反應(yīng),第一節(jié) 抗原抗體反應(yīng)的原理第二節(jié) 抗原抗體反應(yīng)的特點(diǎn)第三節(jié) 影響抗原抗體反應(yīng)的因素第四節(jié) 免疫學(xué)檢測技術(shù)的類型,教學(xué)內(nèi)容：,,,第一

2、節(jié) 抗原抗體反應(yīng)的原理,一、抗原抗體的親和力和親合力,* 親和力（affinity）：是抗體分子上一個(gè)抗原結(jié)合點(diǎn)與相應(yīng)的抗原決定簇之間的相適應(yīng)而結(jié)合的強(qiáng)度，是抗原與抗體間固有的結(jié)合力。,親和常數(shù)（K）：,K值越大?抗體的親和力越高?與抗原結(jié)合越牢固,抗體與抗原結(jié)合是可逆的反應(yīng)，在平衡時(shí)其,親合力（avidity）：是指一個(gè)抗體分子與整個(gè)抗原表位之間結(jié)合的強(qiáng)度，與抗體結(jié)合價(jià)直接相關(guān)。另外也與親和力強(qiáng)弱有關(guān)。,,不形成牢固的共價(jià)鍵，通

3、過非共價(jià)鍵結(jié)合這種弱的結(jié)合力涉及幾種分子間的作用力,二、抗原抗體的結(jié)合力,1、靜電引力 2、范德華引力3、氫鍵 4、疏水作用力,一、靜電引力,概念：抗原和抗體分子帶有相反電荷的氨基和羧基基團(tuán)之間相互的引力。又稱庫倫引力。,靜電引力的大小與兩個(gè)相互作用基團(tuán)間的距離的平方成反比。,二、范德華引力,概念：抗原和抗體相互接近時(shí)，各自所攜帶的原子與原子、分子與分子由于分子極化作用而出現(xiàn)的引力。,結(jié)合力的大小與兩個(gè)相互作用基團(tuán)的

4、極化程度的乘積成正比、與它們之間距離的7次方成反比。,作用力最小,作用大小取決于二者分子空間構(gòu)型的互補(bǔ)性,,概念：供氫體上的氫原子與受氫體原子間的引力。,三、氫鍵結(jié)合力,供氫體：－COOH、－NH2和－OH,受氫體：氧、氮,氫鍵結(jié)合力與供氫體和受氫體之間距離的6次方成反比。 最具特異性（必須供氫體和受氫體互補(bǔ)才能實(shí)現(xiàn)氫鍵的結(jié)合）,四、疏水作用力（疏水鍵）,概念：兩個(gè)疏水基團(tuán)在水溶液中相互接觸時(shí)，由于對水分子排斥而趨向聚集的力。,抗原決

5、定簇與抗體上的結(jié)合點(diǎn)靠近，互相間正、負(fù)極性消失，親水層立即失去。,結(jié)合力最強(qiáng)，約占總結(jié)合力的50％。,,,,,親水膠體,疏水膠體,,轉(zhuǎn)化,,NaCl,可見反應(yīng),血清學(xué)反應(yīng)條件下，抗原抗體均帶負(fù)電荷，使極化的水分子在其周圍形成水化層，成為親水膠體。,當(dāng)抗原與抗體結(jié)合使表面電荷減少，水化層變薄，失去親水性能，抗原抗體復(fù)合物成為疏水膠體,在電解質(zhì)作用下，中和膠體粒子表面的電荷，使各疏水膠體之間靠攏，形成可見的抗原抗體復(fù)合物,三、親水膠體轉(zhuǎn)化

6、為疏水膠體,第二節(jié) 抗原抗體反應(yīng)的特點(diǎn),1.特異性2.比例性3.可逆性4.階段性,一、 特異性（specificity）,1、概念：一種抗原分子通常只能與其刺激機(jī)體后 產(chǎn)生的抗體結(jié)合，這種抗原與抗體結(jié)合 反應(yīng)的專一性稱為特異性。,特異性示意圖,2、決定因素： 由抗原決定簇和抗體分子超變區(qū)之間空間結(jié)構(gòu)的互補(bǔ)性決定的。,3、應(yīng)用： 由于抗原抗體反應(yīng)具有高度特異性，故可用已知的抗原（抗體

7、）來檢測相應(yīng)未知的抗體（或抗原）。,概念：兩種不同的抗原分子具有部分相同或類似結(jié)構(gòu)的抗原表位，可與彼此相應(yīng)的抗血清發(fā)生反應(yīng)。,4、交叉反應(yīng)（cross reactions）,抗原抗體交叉反應(yīng)示意圖,B,二、可逆性（reversibility),1、概念：是指抗原與相應(yīng)抗體結(jié)合成復(fù)合物后，在 一定條件下可解離為游離抗原與抗體的特 性稱為抗原抗體結(jié)合的可逆性。,2、原因：抗原抗體的結(jié)合是分子表面的非共價(jià)鍵

8、結(jié)合，因此形成的復(fù)合物不牢固。,3、抗原抗體反應(yīng)動(dòng)態(tài)平衡式如下：,4、決定抗原抗體解離的因素,（1）抗體與相應(yīng)抗原的親合力。 親合力低的抗體與抗原形成的復(fù)合物較易解離。,（2）環(huán)境因素對復(fù)合物的影響。 PH過高或過低、增加離子強(qiáng)度均可破壞 靜電引力，使抗原抗體結(jié)合力下降，促使其 解離。,注意：解離后的抗原或抗體仍然保持其原有生物活性,三、比例性（proportionality）,1、比例性是指抗原與抗體發(fā)生

9、可見反應(yīng)遵循一定的量比關(guān)系。,2、以絮狀沉淀實(shí)驗(yàn)為例，受抗原抗體比例性的影響非常明顯。,,3、根據(jù)所形成的沉淀物及抗原抗體比例關(guān)系繪制反應(yīng)曲線。,看書上76表7-1,最適比(optimal ratio)：是指形成沉淀物最多，上清液清晰，幾乎無游離抗原或抗體的抗原抗體濃度比。等價(jià)帶(equivalencezone)：形成沉淀物最多的抗原與抗體分子比例合適的范圍。帶現(xiàn)象：在等價(jià)帶前后，由于抗體和抗原過量，形成的沉淀物少，上清液中可測出游

10、離的抗體或抗原的現(xiàn)象。 前帶(prozone)抗體過量時(shí)稱為。 后代(postzone）抗原過量時(shí)稱為。,5、一組概念,,帶現(xiàn)象包括,四、階段性,第一階段：抗原與抗體發(fā)生特異性結(jié)合階段 特點(diǎn)：反應(yīng)快第二階段：反應(yīng)可見階段 特點(diǎn)：反應(yīng)時(shí)間較長,第三節(jié) 抗原抗體反應(yīng)影響因素,一、反應(yīng)物自身因素 *抗原：理化特性、Ag決定簇?cái)?shù)量和種類。 *抗體：1、來

11、源（如：R型抗體 > H型抗體）2、特異性與親和力（如：單克隆抗體）3、濃度,2、酸堿度： 一般抗原抗體反應(yīng)以pH6～9為宜，有補(bǔ)體參與的反應(yīng)以pH7.2～7.4為宜。,二、環(huán)境因素：,1、電解質(zhì)：（1）作用：中和抗原抗體復(fù)合物表面電荷，使其靠攏聚集成出現(xiàn)大塊聚集復(fù)合物。（2）常用電解質(zhì)：0.85%NaCl、各種緩沖液,3、溫度：一般抗原抗體反應(yīng)以15～40℃為宜，最適溫度為37℃。,4、適當(dāng)?shù)恼駬u或攪拌。,第四節(jié)