抗原抗體反應(yīng)及其應(yīng)用

1、,抗原抗體反應(yīng)及應(yīng)用,傅慧 2018年2月,2,,一、抗原抗體反應(yīng)的基本原理二、抗原抗體反應(yīng)的類(lèi)型三、免疫標(biāo)記技術(shù)的應(yīng)用,內(nèi)容,3,一、抗原抗體反應(yīng)的基本原理,,,4,抗原與相應(yīng)抗體的特異性結(jié)合反應(yīng)稱為抗原抗體反應(yīng)。,抗原抗體反應(yīng),Ag,Ab,（ ）,（ ）,如同鑰匙和鎖的關(guān)系,,5,這種反應(yīng)既可在機(jī)體內(nèi)進(jìn)行，也可以在機(jī)體外進(jìn)行。,體內(nèi)體液免疫反應(yīng),1.中和

2、作用: 中和毒素等2.溶菌、殺菌、促進(jìn)吞噬3.免疫損傷: 抗體與組織或細(xì)胞反應(yīng),,沉淀（Precipitation）凝集（Agglutination）細(xì)胞溶解（cell lysis）補(bǔ)體結(jié)合（Complement fixation）,體外,,,抗體存在于血清中,常用血清作試驗(yàn),因此又名血清學(xué)反應(yīng),6,,6,6,,抗原抗體反應(yīng)的原理1、抗原抗體結(jié)合力（4種）2、抗原抗體親和力和親合力3、親水膠體轉(zhuǎn)化疏水膠體,抗原抗體反應(yīng)的

3、原理,電荷引力（靜電引力） 范德華引力 氫鍵結(jié)合力 疏水作用力,,,7,1、抗原抗體結(jié)合力 --靜電引力（electrostatic forces）,靜電引力或庫(kù)侖引力（Cou-lombic forces）是因抗原、抗體帶有相反電荷的氨基（—NH3+）與羧基基團(tuán)（—COO-）間相互吸引的能力，之間的引力，距離越近引力越大。,,8,1、抗原抗體結(jié)合力

4、 --范德華引力（Van der Waals forces）,分子間（或原子間)相互接近，分子極化產(chǎn)生引力，其作用取決于分子空間構(gòu)型，如：凹槽與凸起互補(bǔ)，抗原與抗體，酶與底物。能量小于靜電引力。,,9,1、抗原抗體結(jié)合力 --氫鍵結(jié)合力（hydrogen bond ）,是供氫體上的氫原子與受氫體上氫原子間的引力。其結(jié)合力較強(qiáng)于范德華引力 ，能量大于范德華引力。,,10,1、抗

5、原抗體結(jié)合力 --疏水作用力（hydrophobic interactions）,水溶液中兩個(gè)疏水基團(tuán)相互接觸，由于對(duì)水分子的排斥而趨向聚集的力。作用力最強(qiáng)，占總結(jié)合力的50％。,,11,靜電引力：異性相吸（electrostatic forces），離子鍵（Ionic bond）范德華引力: 作用最?。╲an der Waals interactions）氫鍵: 最具特異性（hy

6、drogen bond ）疏水作用力: 作用最大 （hydrophobic interactions）,疏水作用力>氫鍵結(jié)合力>靜電引力>范德華引力,1、抗原抗體結(jié)合力,,12,2、抗原抗體親和力和親合力,是指抗體分子上一個(gè)抗原結(jié)合點(diǎn)與對(duì)應(yīng)的抗原決定簇之間相適應(yīng)而存在著的引力，是抗原抗體間固有的結(jié)合力。,親和力（affinity),,13,親和力是指反應(yīng)系統(tǒng)中復(fù)雜抗原與相應(yīng)抗體之間的結(jié)合能力。與抗體結(jié)合價(jià)、抗體的親和

7、性、抗原有效表位數(shù)目等相關(guān)。,親合力(avidity),2、抗原抗體親和力和親合力,3、親水膠體轉(zhuǎn)化為疏水膠體,抗體和大多數(shù)抗原同屬蛋白質(zhì)。在通常的血清學(xué)反應(yīng)條件下均帶有負(fù)電荷，使極化的水分子在其周?chē)纬伤瘜樱蔀橛H水膠體，因此蛋白質(zhì)不會(huì)自行凝集出現(xiàn)沉淀。當(dāng)抗原與抗體結(jié)合后，表面電荷減少，水化層變薄;而且由于抗原抗體復(fù)合物形成后，與水接觸的表面積減少，由親水膠體轉(zhuǎn)化為疏水膠體。此時(shí)在電解質(zhì)(如NaCl，的作用下，使各疏水膠體之間進(jìn)一步

8、靠攏、沉淀，形成可見(jiàn)的抗原抗體復(fù)合物。,14,,,可見(jiàn)反應(yīng) (沉淀),抗原抗體復(fù)合物 (疏水膠體),電解質(zhì),抗原(親水膠體),抗體(親水膠體),+,,15,二、抗原抗體反應(yīng)的類(lèi)型,,16,抗原抗體反應(yīng)的類(lèi)型,或,,17,抗原抗體反應(yīng)的類(lèi)型,,18,抗原抗體反應(yīng)的類(lèi)型,19,三、免疫標(biāo)記技術(shù)的應(yīng)用,,20,免疫標(biāo)記技術(shù)的應(yīng)用,免疫標(biāo)記技術(shù)是用熒光素、放射性同位素、酶等標(biāo)記抗體或抗原等所進(jìn)行的抗原抗

9、體反應(yīng)。,特點(diǎn)：敏感度高 特異性強(qiáng) 快速 容易觀察 能進(jìn)行定性、定量、定位檢測(cè)等,,21,1、熒光免疫技術(shù),將結(jié)合有熒光素的熒光抗體進(jìn)行抗原抗體反應(yīng)的技術(shù)。 常用的熒光素有異硫氰酸熒光素（FITC)和羅丹明（RB200)等。它們可與抗體球蛋白中賴氨酸的氨基結(jié)合，在藍(lán)紫光激發(fā)下，可分別出現(xiàn)鮮明的黃綠色及玫瑰紅色。,,22,,①自身抗體檢測(cè),抗核抗體

10、 (均質(zhì)型),抗核抗體 (核膜型),抗核抗體 (斑點(diǎn)型),,歐蒙,熒光免疫技術(shù)的應(yīng)用,,23,熒光免疫技術(shù)的應(yīng)用,②病原體檢測(cè),,呼吸道合胞病毒,流感病毒A/B型,副流感病毒,③免疫病理檢測(cè),④細(xì)胞表面抗原和受體檢測(cè),⑤特殊應(yīng)用：流式細(xì)胞分析,,24,2、放射免疫技術(shù)及其應(yīng)用,用放射性同位素標(biāo)記技術(shù)來(lái)檢測(cè)抗原抗體反應(yīng)的高靈敏度方法。反應(yīng)特點(diǎn)：靈敏，精確；不穩(wěn)定 ；安全性差,標(biāo)記Ag或Ab,,標(biāo)記物純化,,抗原抗體反應(yīng),,抗原抗體復(fù)合

11、物沉淀,測(cè)定其放射活性,,,現(xiàn)臨床實(shí)驗(yàn)室應(yīng)用較少,廣泛應(yīng)用于生物醫(yī)學(xué)研究和臨床診斷領(lǐng)域中各種微量蛋白質(zhì)、激素、小分子藥物和腫瘤標(biāo)志物的定量分析等,,25,3、酶免疫技術(shù),將待測(cè)抗原或抗體吸附于固相表面（聚苯乙烯微量反應(yīng)板），與酶標(biāo)記的抗體或抗原反應(yīng)后，加入底物反應(yīng)（顯色或發(fā)光）的分析方法。,,26,方法,（1）直接法（可檢測(cè)抗原或抗體）：,,27,（2）間接法（有兩種抗體參與，一抗做反應(yīng)橋梁）,1Ab,2Ab酶,一抗,二抗,,28,（

12、3）夾心法（不同抗體將抗原夾在中間反應(yīng)）,① 直接夾心法,② 間接夾心法,,29,酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)——夾心法,,30,ELISA 應(yīng)用的范圍很廣，而且正在不斷地?cái)U(kuò)大。臨床實(shí)驗(yàn)室主要應(yīng)用于：1、傳染病的診斷，病毒如病毒性肝炎（甲肝抗體、乙肝三對(duì)、丙肝抗體、丁肝抗體、戊肝抗體）、風(fēng)疹病毒、皰疹病毒、輪狀病毒等；2、細(xì)菌如結(jié)核桿菌、幽門(mén)螺桿菌等；3、也用于一些蛋白質(zhì)的檢測(cè)，如各種免疫球蛋白、補(bǔ)體、腫瘤標(biāo)志物（甲胎蛋白、癌胚抗原、前列腺