血小板抗原抗體檢測及其輸血科應(yīng)用

1、血小板抗原抗體檢測及臨床應(yīng)用,吉林芬瑞生物制品銷售有限公司李一夫,,,目 錄 / contents,血小板抗原,血小板抗體與疾病,血小板抗體檢測的臨床意義和臨床應(yīng)用,血小板簡介,血小板：D:2-5um V:紅細(xì)胞*1/5功能：促進(jìn)止血和加速凝血正常范圍：100-300×109/L,骨髓干細(xì)胞,,,,,,胞質(zhì)塊脫落,來源：,多功能祖細(xì)胞,巨核祖細(xì)胞,幼巨核細(xì)胞,巨核細(xì)胞,血小板,血小板形態(tài),靜息狀態(tài),活化

2、狀態(tài),,,血小板抗原,血小板“非特異性”抗原,血小板“特異性”抗原 HPA抗原,HLA-Ⅰ類抗原 ABH抗原,血小板具有HLA-Ⅰ類抗原（HLA-A、HLA-B抗原和少量HLA-C抗原），無HLA-Ⅱ類抗原。故輸注血小板要比器官移植所需配型簡單。血小板個體間HLA-Ⅰ類抗原位點(diǎn)數(shù)差別不大。每個血小板上至少有20000個HLA抗原位點(diǎn)。,HLA抗原,部分為血小板的固有蛋白，另一部分從血漿中吸附。血小板上的ABH

3、抗原個體之間表達(dá)不同，約5%的非O型個體為A抗原或B抗原的高表達(dá)者。故血小板輸血應(yīng)同型輸注；抗體檢測應(yīng)采用O型血小板，以排除ABO系統(tǒng)抗體的干擾?！鬐PIb、GPIIb/IIIa、 GPIa/Iia、CD109等也攜帶少量ABH抗原,ABH抗原,主要存在于血小板膜的GP分子上，也少量存在于血管內(nèi)皮細(xì)胞、結(jié)締組織細(xì)胞和平滑肌細(xì)胞。1990年國際輸血協(xié)會血小板免疫學(xué)工作組提出了HPA命名，以發(fā)現(xiàn)的時間順序排列：HPA-1、HPA-2、

4、HPA-3等系統(tǒng)。,HPA抗原,已確定了33個HPA，其中12 個抗原為雙等位基因表達(dá)（HPA-1,-2,-3,-4，-5和-15）。其中高頻率抗原命名a，低頻率抗原命名b。其余21個抗原為低頻率抗原，尚未發(fā)現(xiàn)對偶抗原，命名為bw。單核苷酸多態(tài)性（SNP）:33個HPA中均已搞清楚基因背景，其中32個HPA的多態(tài)性型是由一個氨基酸置換所致，而這又是由編碼血小板膜糖蛋白（GP）基因的一個核苷酸的不同所致。HPA-14bw不具有單核

5、苷酸多態(tài)性。其核苷酸置換發(fā)生在 AAG1929-31。,HPA抗原,,,HPA抗原,HPA抗原,血小板抗原定型,血清學(xué)定型即用已知特異性抗體檢測血小板血型抗原缺點(diǎn)：特異性抗體來源困難 ---人血清中血小板抗體通常為多特異性 ---單克隆抗體匱乏，目前國際上僅有HPA-1a單抗， 無其它HPA單抗。基因定型限制性片段長度多態(tài)性分析（RFLP）序列特異性寡核苷酸聚合酶鏈反

6、應(yīng)(PCR-SSO)序列特異性引物聚合酶鏈反應(yīng)(PCR-SSP),用途：（1）健康人群HPA基因分型，建立已知HPA基因型的血小板獻(xiàn)血員庫。（2）檢測受者HPA基因型，以便從血小板獻(xiàn)血員庫中尋找與其HPA基因型相 匹配的血小板供者。（3）檢測患者HPA基因型，輔助臨床胎兒/新生兒免疫性血小板減少癥、輸 血后紫癜及血小板輸注無效癥等疾病的病因診斷。（4）對特定區(qū)域或種族人群HPA基因分型，可為人類遺傳學(xué)研究提

7、供相關(guān) 資料和證據(jù)。,血小板抗原定型,血小板抗體的產(chǎn)生方式,以上途徑產(chǎn)生的血小板同種抗體與血小板上的相應(yīng)抗原結(jié)合，導(dǎo)致血小板被內(nèi)皮網(wǎng)狀系統(tǒng)清除。,移植（骨髓、器官）,輸血小板、紅細(xì)胞（尤其是沒有濾白的紅細(xì)胞）,血小板抗體與部分相關(guān)疾病,,,胎盤屏障,,,母體同種異體免疫,胎兒血小板減少,舉例——NAIT,NAIT,胎母同種異體免疫血小板減少癥（fetomaternal alloimmune thrombocytopenia，F(xiàn)

8、MAIT）致病機(jī)理與新生兒溶血?。℉DN）相似，前者是由胎兒父母血小板抗原不合引起的血小板減少癥，后者為紅細(xì)胞抗原不合引起的溶血性疾病。由于胎兒遺傳自父親的血小板抗原刺激母體產(chǎn)生IgG型的抗血小板抗體，該抗體能通過胎盤進(jìn)入胎兒體內(nèi)并與具有相應(yīng)抗原的血小板結(jié)合，此致敏血小板在胎兒的血液循環(huán)中被清除而使得胎兒血小板減少，出現(xiàn)瘀點(diǎn)和瘀斑，其嚴(yán)重者會導(dǎo)致神經(jīng)系統(tǒng)損傷（占已報道病例的20%）、10%出現(xiàn)顱內(nèi)出血(死亡率近100%）。因多數(shù)病例

9、在出生后才得以診斷，故此病也稱作新生兒同種異體免疫血小板減少癥。初次妊娠婦女即可發(fā)生FMAIT，其發(fā)病率大約為1/800-1500 。,FMAIT患兒病情變化較大，具有自限性，常在出生后 2-3周恢復(fù)。輕度血小板減少患兒有時沒有任何臨床癥狀。病情較重患兒 臨床表現(xiàn)為皮膚、體內(nèi)外黏膜出血，出現(xiàn)紫癜、瘀點(diǎn)或瘀斑。嚴(yán)重患兒可能發(fā)生顱內(nèi)出血（intracranial haemorrhage， ICH），占10%。與FMA

10、IT相關(guān)的ICH 80%發(fā)生在子宮內(nèi)，其中14%發(fā)生在妊娠20 周前，28%發(fā)生在妊娠30周前。,NAIT臨床表現(xiàn),母體血清抗HPA抗體檢測，然而母體抗體水平到預(yù)產(chǎn)期時逐漸下降，約有30%的病例抗體陰性。父母雙親的HPA基因檢測，在高加索地區(qū)采取對其HPA-1和HPA-5基因檢測，而在亞洲地區(qū)應(yīng)考慮進(jìn)行HPA-4和HPA-5基因檢測。父母雙親交叉配型實驗，將母體血清與父親血小板進(jìn)行交叉配型實驗，即使不能確切知道不相合的

11、抗原，但這種方法也能發(fā)現(xiàn)母體是否存在血小板同種異體免疫反應(yīng)。,NAIT早期診斷與篩查,NAIT,NAIT,舉例——血小板輸注無效,,血小板抗體檢測常用方法,方法,指標(biāo),,血小板抗體檢測方法-固相凝集法,血小板抗體篩檢，包括HLA抗體、HPA抗體及其它血小板反應(yīng)性抗體。輔助血小板相關(guān)免疫性疾病的診斷。血小板交叉配型，為患者篩選相容性的血小板或血小板供者，避免血小板輸注無效癥的發(fā)生?；颊咦陨砜贵w檢測，包括血小板結(jié)合抗體和血清中游離抗體。

12、檢測血小板結(jié)合抗體可將患者血小板平鋪在反應(yīng)孔后，直接加入抗人IgG和指示紅細(xì)胞進(jìn)行檢測。血清中的游離抗體可通過患者自身血小板和血清反應(yīng)來檢測。,用途：,血小板抗體檢測方法-固相凝集法,1.主要應(yīng)用科室：輸血科，血液病科，婦產(chǎn)科，新生兒科。 2.輸血科：⑴.預(yù)防血小板輸注無效癥的發(fā)生：通過對患者進(jìn)行血小板抗體篩查以及隨后的與血小板供者的交叉配型試驗，篩選和患者血小板抗原配合性高的血小板供者，以提高血小板輸注有效率，防止血小板輸注無效癥

13、的發(fā)生。 ⑵.指導(dǎo)臨床輸血，保障輸血安全：輸血科在常規(guī)血型鑒 定中加入血小板抗體檢測，可對臨床輸血中出現(xiàn)發(fā)熱、黃疸、急性肺 損傷等非溶血性輸血反應(yīng)的風(fēng)險作出評估。,血小板抗體檢測臨床意義,3.婦產(chǎn)科:孕前，孕期，產(chǎn)后 1).反復(fù)流產(chǎn)、不孕不育查因：對于反復(fù)和習(xí)慣性流產(chǎn)史（尤其是孕早期）和不孕不育史的患者，檢測患者血清和血漿中血小板抗體的水平，可對其造成流產(chǎn)和不孕不育的原因作出輔助診斷。2

14、).產(chǎn)檢（尤其針對高齡和二胎產(chǎn)婦）孕早期檢測：在孕早期（三個月）產(chǎn)檢中常規(guī)檢測母親與胎兒的血小板相容性，對于孕早期出現(xiàn)流產(chǎn)和死胎的風(fēng)險評價具有非常重要的意義孕晚期檢測：在孕晚期（胎兒出生前）檢測母體血清或血漿中血小板抗體水平，對胎兒出生后罹患新生兒血小板同種免疫性疾病風(fēng)險評價具有非常重要的意義。3).妊娠期血小板降低的查因：孕婦在妊娠期血小板減少是一種常見現(xiàn)象，如是生理性降低則危害不大，往往生產(chǎn)后會恢復(fù)正常。但如果血小板的降低是由

15、于孕婦自身免疫性疾病引起的則會引起流產(chǎn)、死胎、以及新生兒相關(guān)的血小板減少性疾病，危害嚴(yán)重。,血小板抗體檢測臨床意義,,4.血液病科：在血液腫瘤科檢測患者血清和血漿中自身血小板抗體的水平和特異性，可輔助診斷自身免疫性疾病如ITP等。5.新生兒科：新生兒血小板同種免疫性疾病的診斷。,血小板抗體檢測臨床意義,婦產(chǎn)科領(lǐng)域 輸血科常規(guī)輸血前的檢測（術(shù)前備血） 預(yù)防血小板輸注無效,血小板抗體檢測臨床應(yīng)用,曾有反復(fù)流產(chǎn)史的育齡婦女，可在懷

16、孕前進(jìn)行夫妻雙方的血小板相關(guān)抗體檢測，對由于母嬰血小板血型不合而導(dǎo)致的流產(chǎn)或 NAIT進(jìn)行早期的診斷和治療。,青年女性流產(chǎn)率逐年上升,每一次懷孕、流產(chǎn)都可能造成母體因外來抗原刺激而產(chǎn)生抗體，危及下一次妊娠。,如何在孕前/孕期正確地評估因父母血小板血型不合引起的流產(chǎn)、NAIT的風(fēng)險？,血小板抗體檢測在婦產(chǎn)科領(lǐng)域的應(yīng)用,血小板抗體檢測在婦產(chǎn)科領(lǐng)域的應(yīng)用,,父母血小板血型不合引起新生兒同種免疫性血小板減少癥的初步研究 鄧晶、夏文杰、葉

17、欣、徐秀章、邵媛、陳揚(yáng)凱、丁浩強(qiáng)、羅廣平、王嘉勵（廣州血液中心臨床輸血研究所）熱帶醫(yī)學(xué)雜志 2012年11月第12卷第11期文中觀點(diǎn)： 通過收集22例臨床上確診為新生兒免疫性血小板減少癥（NIT）的患兒為研究對象，采用 ELISA 方法檢測患兒及其父母的血小板相關(guān)抗體，應(yīng)用 PCR-SSP法對患兒及父母進(jìn)行 HLA及HPA基因分型，根據(jù)相應(yīng)的抗原進(jìn)行抗體特異性分析。結(jié)果22例NIT患兒中，14 例是由于同種免疫性因素引起的，其中

18、 27.3％（6例)由 HLA抗體引起,13.6％（3例）由HPA抗體引起，22.7％（5例）由HLA＋HPA 抗體引起 ；9.1％（2例）由于被動免疫性因素引起;27.3％（6例 ）由自身抗體引起 。其中,同種免疫性抗體以抗 HLA-A2、19，抗-B40 及抗 HPA-3a多見。結(jié)論： 在新生兒免疫性血小板減少癥中，主要以父母血小板血型不合引起新生兒同種免疫性血小板減少癥為主，臨床產(chǎn)前診斷預(yù)防和產(chǎn)后治療具有重要意義。,血小板抗體檢

19、測在婦產(chǎn)科領(lǐng)域的應(yīng)用,實驗數(shù)據(jù),血小板抗體檢測在婦產(chǎn)科領(lǐng)域的應(yīng)用,血小板抗體檢測在婦產(chǎn)科領(lǐng)域的應(yīng)用,,血小板抗體檢測在婦產(chǎn)科領(lǐng)域的應(yīng)用,血小板抗體檢測在婦產(chǎn)科領(lǐng)域的應(yīng)用,,,實驗結(jié)果,血小板抗體檢測在婦產(chǎn)科領(lǐng)域的應(yīng)用,,血小板抗體檢測在婦產(chǎn)科領(lǐng)域的應(yīng)用,,血小板抗體檢測應(yīng)用：非溶血性輸血反應(yīng)的風(fēng)險評估,白細(xì)胞特異性和組織相容性（HLA）抗體是引起臨床非溶血性發(fā)熱性輸血不良反應(yīng)的最主要原因，尤其是有輸血史、輸血小板史、妊娠史、器官移植史、

20、自身免疫性疾病史等的患者的臨床輸血工作中，非溶血性發(fā)熱反應(yīng)是臨床最常見的輸血不良反應(yīng)（約70%），文獻(xiàn)報道輸注紅細(xì)胞為2～6%，輸注血小板為20～30%，多次輸血患者高達(dá) 27％～63％，而非溶血性發(fā)熱性輸血反應(yīng)與白細(xì)胞特異性和組織相容性（HLA）抗體密切相關(guān)，是影響臨床安全輸血的嚴(yán)重因素。白細(xì)胞特異性和組織相容性（HLA）抗體的檢測對于預(yù)防和減少非溶血性發(fā)熱性輸血反應(yīng)非常有意義。,輸血反應(yīng)與血小板抗體的關(guān)系,,血小板抗體檢測應(yīng)用：非溶

21、血性輸血反應(yīng)的風(fēng)險評估,血小板輸血是提高患者（特別是腫瘤和移植患者）血小板計數(shù)，防止出血最為快速、有效的方法和手段。 然而，血小板輸血并不是每次都能達(dá)到滿意效果，特別是反復(fù)多次隨機(jī)輸注血小板的患者，體內(nèi)極易產(chǎn)生血小板抗體，從而破壞輸入的血小板并引起輸注無效。 文獻(xiàn)報道約有20％~50％白血病患者，80％的再生障礙性貧血患者長期隨機(jī)輸注血小板后會出現(xiàn)輸注無效狀態(tài)，導(dǎo)致患者因血小板計數(shù)低下而自發(fā)出血或出血不止，甚至死亡。

22、 我國目前大多數(shù)臨床單位采用隨機(jī)輸注血小板，導(dǎo)致血小板輸注無效頻繁發(fā)生。 后果：患者病情得不到改善，病危甚至死亡；浪費(fèi)財力、物力；浪費(fèi)寶貴的血小板資源；不利于血站及輸血科業(yè)務(wù)水平的提高。,血小板抗體檢測的應(yīng)用：血小板輸注無效的預(yù)防,血小板輸注無效的危害,1）患者發(fā)生免疫反應(yīng)，加重病情。 2）患者病情得不到改善，病危甚至死亡。 3）浪費(fèi)財力、物力、寶貴的血小板資源。 4）存在醫(yī)療糾紛隱患。

23、 5）不利于采供血機(jī)構(gòu)和醫(yī)療機(jī)構(gòu)業(yè)務(wù)水平的提高。,血小板抗體檢測的應(yīng)用：血小板輸注無效的預(yù)防,血小板抗體檢測的應(yīng)用：血小板輸注無效的預(yù)防,血小板抗體檢測的應(yīng)用：血小板輸注無效的預(yù)防,血小板輸血采用隨機(jī)供者血小板有效率不超過30%；采用交叉配型相容性血小板有效率為92%，而對于重度血小板免疫患者，輸注相容性血小板有效率為70%。,血小板交叉配型意義,血小板抗體檢測的應(yīng)用：血小板輸注無效的預(yù)防,對844例貧血、白血病、血小板減

24、少及腫瘤等疾病患者進(jìn)行血小板抗體檢測。其中有效病例766例，其余78例患者病例不祥。檢測結(jié)果統(tǒng)計如下：,臨床數(shù)據(jù)：,血小板抗體檢測的應(yīng)用：血小板輸注無效的預(yù)防,海南省人民醫(yī)院,共檢測102例患者，陽性18例，平均陽性率17.6%,血小板抗體檢測的應(yīng)用：血小板輸注無效的預(yù)防,9例抗篩陽性患者，8例尋找到了相合的血小板，輸注效果良好。,《中華臨床醫(yī)師雜志》 2012/01,血小板抗體檢測的應(yīng)用：血小板輸注無效的預(yù)防,57例血小板輸注無效

25、患者中，血小板抗體陽性患者為21例（37％）,采用固相凝集法對有血小板抗體的21例患者進(jìn)行輸注前交叉配型來篩選血小板供者。選擇交叉配型陰性或反應(yīng)最弱的的供者血小板給患者輸注。21例患者輸注相容性血小板后，所有患者1h CCI＞7.5×109／Ｌ，24h CCI＞4.5×109／Ｌ，有效率為100％。,吉林大學(xué)第三醫(yī)院,《中國實驗診斷學(xué)》 2013年第1期,血小板抗體檢測的應(yīng)用：血小板輸注無效的預(yù)防,廣州血液中

26、心,95例血小板輸注患者經(jīng)固相凝集法檢測，血小板抗體陽性32例，抗體陽性率為33.7%。,將血小板抗體陽性患者隨機(jī)分成未配型組和配型組，各16例。,《廣東醫(yī)學(xué)院學(xué)報 》 2012/1,血小板抗體檢測的應(yīng)用：血小板輸注無效的預(yù)防,總 結(jié),1. 血小板表面有很復(fù)雜的抗原系統(tǒng)；,2.血小板表面的抗原能夠刺激機(jī)體產(chǎn)生相應(yīng)的抗體，導(dǎo)致血小板輸注無效、不良輸血反應(yīng)、NAIT、流產(chǎn)等疾??；,3.對于不相合的紅細(xì)胞輸注，人們無法容忍,而對于不相

27、合的血小板輸注卻認(rèn)為是常規(guī)，事實上血小板輸注無效，同樣面臨著死亡——出血而亡;,建 議,3. 血小板抗體檢測對診斷NAIT、評估胎母血小板血型不合導(dǎo)致的流產(chǎn)風(fēng)險有重要意義。,2. 血小板抗體檢測對評估常規(guī)輸血中非溶血性輸血反應(yīng)發(fā)生的風(fēng)險，保障輸血安全具有重要意義。,1. 為了有效地利用血小板，珍惜稀缺的血小板資源，輸注血小板之前應(yīng)進(jìn)行血小板抗體檢測和交叉配型，規(guī)范的進(jìn)行血小板配合性輸注,即輸注前檢測。,血小板安全性輸注源于博德生物！