實(shí)驗(yàn)一抗原抗體反應(yīng)--凝集反應(yīng)

1、抗原抗體反應(yīng),免疫學(xué),,抗原與相應(yīng)抗體的特異性結(jié)合反應(yīng)稱為抗原抗體反應(yīng)(antigen-antibody reaction)。,,抗原抗體反應(yīng),抗原抗體反應(yīng)原理,抗原抗體結(jié)合反應(yīng)是抗原決定簇和抗體分子超變區(qū)之間的相互作用，是一種分子表面的特異的可逆的弱結(jié)合力。這些弱結(jié)合力只能在極短距離內(nèi)才能發(fā)生效應(yīng)。,,抗原抗體結(jié)合力,抗原和抗體的結(jié)合雖然是互補(bǔ)性，非共價(jià)鍵，特異性結(jié)合，抗原與抗體這種弱的結(jié)合力涉及下列幾種分子間的作用力。,,l. 靜電

2、引力,2.范德華引力,3.氫鍵結(jié)合力,4.疏水作用力,,親水膠體轉(zhuǎn)化為疏水膠體示意圖,,,,親水膠體,疏水膠體,,轉(zhuǎn)化,,NaCl,可見反應(yīng),,抗原抗體反特點(diǎn),,比例性,可逆性,敏感性,特異性,特異性示意圖,,,,,,,,比例性示意圖,抗體過量,比例合適,抗原的量,抗原過量,抗體沉淀的量,,,前帶,等價(jià)帶,后帶,,抗原抗體反應(yīng)比例性的機(jī)制，可用網(wǎng)格學(xué)說加以說明。因?yàn)樘烊豢乖蠖嗍嵌鄡r(jià)的，抗體至少為兩價(jià)，當(dāng)抗原與抗體在等價(jià)帶結(jié)合時(shí)，相互交

3、叉連接成具有立體結(jié)構(gòu)的網(wǎng)格狀復(fù)合體，形成肉眼可見的沉淀物。當(dāng)抗原或抗體過剩時(shí)，由于過剩方的結(jié)合價(jià)得不到飽和，只能形成小網(wǎng)格復(fù)合物。 但是，當(dāng)抗原或抗體為單價(jià)，不管抗原與抗體的量比關(guān)系是否合適，均不能出現(xiàn)可見反應(yīng)現(xiàn)象。,,,,抗體,混有SPAg,抗體-SPAg,抗體-SPAg,分離劑,一、抗原抗體結(jié)合,二、分離抗體,可逆性示意圖,抗體,,抗原抗體反應(yīng)影響因素,1.抗原、抗體的自身因素的影響;2.電解質(zhì)、酸堿度、溫度及時(shí)間等實(shí)驗(yàn)環(huán)境因

4、素的影響。,,第四節(jié) 抗原抗體類型,1.可溶性抗原與相應(yīng)抗體結(jié)合所產(chǎn)生的沉淀反應(yīng)2.顆粒性抗原與相應(yīng)抗體結(jié)合所發(fā)生的凝集反應(yīng) 3.抗原抗體結(jié)合后激活補(bǔ)體所致的細(xì)胞溶解反應(yīng) 4.細(xì)菌外毒素或病毒與相應(yīng)抗體結(jié)合所致的中和反應(yīng) 5.免疫標(biāo)記的抗原抗體反應(yīng)。,,凝集反應(yīng),類型： ★直接凝集反應(yīng),★間接凝集反應(yīng),★間接凝集抑制試驗(yàn),★協(xié)同凝集試驗(yàn),,1.凝集反應(yīng),,直接凝集試驗(yàn)：顆粒性抗原在有電解質(zhì)的參與下，直接與相應(yīng)抗體結(jié)合出現(xiàn)的

5、凝集現(xiàn)象。,間接凝集試驗(yàn)：用人工方法將可溶性抗原(或 抗體）吸附或偶聯(lián)于載體上，使之成為致敏 載體顆粒，再與相應(yīng)抗體（或抗原）作用， 在適宜電解質(zhì)的參與下，出現(xiàn)的凝集現(xiàn)象。,,,,,載體,可溶性抗原,致敏,致敏顆粒,NS,凝集顆粒,（正向）間接凝集試驗(yàn),用特異性抗原致敏載體，檢測(cè)標(biāo)本中的相應(yīng)抗體的方法。,待測(cè)抗體,,反向間接凝集試驗(yàn),＋,用特異性抗體致敏載體，檢測(cè)標(biāo)本中的相應(yīng)抗原的方法。,,,,載體,已知抗體,致敏,致敏顆粒,NS

6、,凝集顆粒,待測(cè)抗原,,間接凝集抑制試驗(yàn),待測(cè)抗原,已知抗體,特異結(jié)合,抗原抗體復(fù)合物,NS,,＋,,,致敏顆粒,用抗原致敏載體及相應(yīng)抗體作為診斷試劑，用于檢測(cè)標(biāo)本中是否存在與致敏載體相同的抗原。,無凝集顆粒為陽(yáng)性,,間接凝集抑制試驗(yàn),待測(cè)抗原,已知抗體,無結(jié)合,抗原抗體分散,NS,,＋,,致敏顆粒,有凝集顆粒為陰性,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,原理,抗球蛋白試驗(yàn)(Coombs試驗(yàn)),機(jī)體受某些抗原刺激后產(chǎn)生“不

7、完全抗體”，其與相應(yīng)抗原結(jié)合后不出現(xiàn)可見的凝集現(xiàn)象，但能封閉抗原決定簇，使其不能再與完全抗體結(jié)合。,類型,,原理,協(xié)同凝集試驗(yàn),SPA能與血清中的IgG類抗體的Fc段非特異性結(jié)合，而兩個(gè)Fab段暴露在葡萄球菌菌體表面，仍然保持正常的抗體活性，與特異性抗原相遇時(shí)，能出現(xiàn)特異的凝集現(xiàn)象。,,原理圖,IgG,SPA,SPA- IgG,待測(cè)抗原,SPA- IgG-待測(cè)抗原凝集顆粒,混合,,,,,加入,,實(shí)驗(yàn)材料,1.待測(cè)血清樣品2.CRP乳膠