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1、本研究在人絨毛膜促性腺激素(hCG)的結(jié)合多肽的基礎(chǔ)上應(yīng)用嫁接抗體技術(shù)制備抗hCG單域抗體，簡(jiǎn)化單域抗體制備過程，提高多肽生化穩(wěn)定性。利用單域抗體通用骨架(cAbBCII10)，以hCG結(jié)合多肽取代互補(bǔ)決定區(qū)CDR1或CDR3，合成cAbBCII10嫁接抗體全基因序列并與sfGFP基因序列融合后，插入到帶有His標(biāo)簽的原核表達(dá)載體pET30a(+)中，成功構(gòu)建了pET30a-(His6)-cAbBCII10-CDR1/hCGBP1-sf
2、GFP與pET30a-(His6)-cAbBCII10-CDR3/hCGBP3-sfGFP融合蛋白表達(dá)質(zhì)粒。將重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)化大腸桿菌BL21(DE3)，用IPTG誘導(dǎo)表達(dá)融合蛋白，得到高表達(dá)量的可溶性融合蛋白。利用Ni-NTA親和柱純化得到純蛋白，應(yīng)用SDS-PAGE鑒定純化的蛋白為正確表達(dá)的目標(biāo)蛋白。通過抗原抗體結(jié)合實(shí)驗(yàn)，發(fā)現(xiàn)hCG結(jié)合多肽嫁接到單域抗體通用骨架的互補(bǔ)決定區(qū)CDR1或CDR3后都有抗原結(jié)合活性，具有相似的抗體滴度，且嫁接
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