生物樣品微量藥物的分析技術(130535)

1、1生物樣品微量藥物的分析技術體內(nèi)藥物分析是指體內(nèi)樣品（生物體液、器官或組織）中藥物及其代謝物或內(nèi)源性生物活性物質(zhì)的定量分析。體內(nèi)藥物分析與體內(nèi)藥代動力學研究和臨床治療藥物監(jiān)測密切相關，它直接關系到藥物的體內(nèi)作用機制探討與質(zhì)量評價和藥物臨床使用的安全、有效與合理。藥物產(chǎn)生藥理作用的強度與其在體內(nèi)作用部位（受體組織）的濃度直接相關，而藥物在體內(nèi)主要依靠血液輸送至作用部位，因此血藥濃度可作為藥物在作用部位濃度的表觀指標，即血液是體內(nèi)藥物分析的

2、主要樣品。另外，尿液、唾液、頭發(fā)和臟器組織等也可作為體內(nèi)樣品。藥物在體內(nèi)的某些代謝產(chǎn)物常具有一定的生理活性，它們在體內(nèi)的變化規(guī)律對母體藥物的藥理學與毒理學評價極為重要；機體內(nèi)源性生物活性物質(zhì)往往參與機體重要的生理過程，其變化規(guī)律的異常改變也與某些疾病的發(fā)病機制密切相關。所以，體內(nèi)特定藥物代謝物和機體內(nèi)源性生物活性物質(zhì)也是體內(nèi)藥物分析監(jiān)測的目標。藥物進入體內(nèi)后，其化學結構與存在狀態(tài)均可能發(fā)生顯著變化。在體液中，藥物的存在形式多樣化，除游離

3、型的原形藥物或其代謝物，也有原形藥物或其代謝物與葡萄糖醛酸等內(nèi)源性小分子經(jīng)共價結合的結合物（或稱綴合物，conjugate），還有與蛋白質(zhì)分子經(jīng)氫鍵及其他分子間力結合的結合型藥物；而且藥物及其代謝物的濃度通常很低、干擾物質(zhì)多。在測定體內(nèi)藥物及其特定代謝物或內(nèi)源性生物活性物質(zhì)時，除少數(shù)情況將體液作簡單處理后可直接測定外，通常在測定之前要對體內(nèi)樣品進行分離凈化與濃集等樣品前處理，從而為體內(nèi)樣品中藥物的測定提供良好的環(huán)境與條件。常用的樣品前處

4、理方法包括：去除蛋白質(zhì)、綴合物水解、化學衍生化、分離濃集等方法。其中，去除蛋白質(zhì)法主要有溶劑沉淀法、中性鹽析法、強酸沉淀法、超濾法及熱凝固法；分離濃集法通常采用液相萃取、固相萃取與膜分離技術。從藥物的研究到臨床應用，藥物質(zhì)量的正確評價尺度是有效性和安全性，即根據(jù)藥物在體內(nèi)的表現(xiàn)作出評價。新藥進入臨床之前，首先在試驗動物體內(nèi)進行藥代動力學和毒代動力學研究。所以，體內(nèi)藥物分析的對象不僅是人3內(nèi)樣品中生物大分子類藥物的測定；生物學或微生物學方

5、法適用于體內(nèi)樣品中抗生素類藥物的測定。建立可靠的和可重復的定量分析方法是進行體內(nèi)樣品分析的基礎。為了保證分析方法的可行性與可靠性，體內(nèi)樣品分析方法在用于實際樣品的分析之前，必須對方法進行充分的方法學驗證。體內(nèi)樣品分析方法的驗證分為全面驗證和部分驗證兩種情況。對于首次建立的體內(nèi)樣品分析方法、新的藥物或新增代謝物定量分析，應進行全面的方法驗證。分析方法驗證的內(nèi)容包括分析方法的效能指標（即：特異性、標準曲線和定量范圍、定量下限、精密度與準確度

6、）與樣品（包括：體內(nèi)樣品、制備樣品及標準儲備液）穩(wěn)定性及提取回收率的驗證。第一節(jié)常用體內(nèi)樣品的制備與貯藏一、體內(nèi)樣品的種類體內(nèi)藥物分析采用的體內(nèi)樣品包括血液、尿液、唾液、頭發(fā)、臟器組織、乳汁、精液、腦脊液、淚液、膽汁、胃液、胰液、淋巴液、糞便等樣品。但其中最常用的是血漿或血清，因為它們可以較好地體現(xiàn)藥物濃度和治療作用之間的關系。當藥物在體內(nèi)被迅速代謝，且其代謝物大量排泄至尿中時，也采用尿液樣品，使在血樣中不易檢出的藥物，以代謝物形式在尿

7、液中被檢測。尿液可用于生物利用度、尿藥排泄量等的測定。某些藥物，如苯妥英等的唾液濃度被認為可以代表血漿中游離藥物的濃度，所以唾液也可用于某些藥物的臨床治療監(jiān)測；如果懷疑藥物可損傷血腦屏障，腦脊液的藥物濃度偶爾也進行測定；頭發(fā)作為體內(nèi)樣品可用于藥物濫用的監(jiān)測或微量元素的測定。在進行動物試驗研究藥物體內(nèi)吸收、分布狀態(tài)以及藥物過量中毒死亡患者的解剖檢驗，常采用胃、腸、肝、腎、肺、腦、肌肉、組織等作為體內(nèi)樣品。在特殊情況下亦有采用乳汁、精液、淚