藥物分析生物堿類藥物的分析

1、第六節(jié) 生物堿類藥物的分析,生物堿（alkaloids）是一類重要的天然有機化合物，多數(shù)具有復雜的氮雜環(huán)結構，生理活性顯著，多顯堿性, 絕大多數(shù)存在于植物體內，已有數(shù)十種廣泛應用于臨床。中國藥典收錄的生物堿類化學藥物主要有苯烴胺類、托烷類、喹啉類、吲哚類、黃嘌呤類等。,（一）概述,（二）常見藥物的結構與性質,一、生物堿類藥物性質與結構分析,性狀,大部分由C、H、O、N等元素組成多為結晶或非晶型固體無色，少數(shù)為有色物質多具有苦味，

2、個別味極苦而辛辣，一般無臭固體多具有確定的熔點，部分具有揮發(fā)性或升華性。,（一）概述,多具有堿性，受電效應及立體效應等影響，強弱差異較大。堿性順序為：季銨堿 ＞ 脂環(huán)胺和脂肪胺 ＞ 芳香脂胺 ＞ 氨 ＞ 芳胺 ＞ N-芳雜胺 ＞環(huán)酰胺（近中性）；嗎啡兼有兩性；茶堿顯酸性。堿性的生物堿可利用堿性與酸成鹽，如鹽酸麻黃堿；堿性極弱的生物堿，以游離狀態(tài)存在，如咖啡因和利血平。,堿性,游離生物堿大都不溶或難溶于水，溶于或易溶于有機溶劑

3、堿性生物堿在稀酸溶液中成鹽而溶解。生物堿的鹽類多易溶于水，不溶或難溶于有機溶劑,溶解性,多具旋光性。中國藥典中對許多生物堿都規(guī)定了旋光度測定。,旋光性,藥典收載藥物,中國藥典（2010年版）主要收載有麻黃堿、偽麻黃堿、秋水仙堿、阿托品、山莨菪堿、硫酸奎寧、奎尼丁、嗎啡、可待因、小檗堿、士的寧、長春堿、長春新堿、利血平、咖啡因、茶堿、毛果蕓香堿、川芎嗪等常用生物堿類藥物,（二）常見生物堿類藥物的結構與性質,1. 苯烴胺類生物堿,2

4、. 托烷類生物堿,3. 喹啉類生物堿,4. 異喹啉類生物堿,5. 吲哚類生物堿,6. 黃嘌呤類生物堿,其它種類,1. 苯烴胺類生物堿,,①藥物結構,②理化性質,鹽酸麻黃堿（ephedrine hydrochloride）鹽酸偽麻黃堿（pseudoephedrine hydrochloride）秋水仙堿（colchicine）,一、生物堿類藥物性質與結構分析,①苯烴胺類藥物結構,,鹽酸麻黃堿（ephedrine hydrochlo

5、ride）,白色針狀結晶或結晶性粉末，無臭，味苦,一、生物堿類藥物性質與結構分析,鹽酸偽麻黃堿（pseudoephedrine hydrochloride）,①苯烴胺類藥物結構,,白色結晶性粉末，無臭、味苦,一、生物堿類藥物性質與結構分析,①苯烴胺類藥物結構,秋水仙堿（colchicine）,,淡黃色結晶性粉末,一、生物堿類藥物性質與結構分析,②苯烴胺類藥物理化性質,性狀及溶解性,堿性,氨基醇雙縮脲反應,旋光性,紫外特征吸收,一、生

6、物堿類藥物性質與結構分析,,鹽酸麻黃堿水中易溶，乙醇中溶解，三氯甲烷和乙醚中不溶；鹽酸偽麻黃堿極易溶于水，易溶于乙醇，微溶于三氯甲烷；秋水仙堿無臭，遇光色漸變深，乙醇、三氯甲烷中易溶，水中溶解，乙醚中極微溶。,②苯烴胺類藥物理化性質,性狀及溶解性,一、生物堿類藥物性質與結構分析,麻黃堿和偽麻黃堿，堿性較強，易與酸成鹽；秋水仙堿堿性很弱，不與酸成鹽。,②苯烴胺類藥物理化性質,堿性,一、生物堿類藥物性質與結構分析,鹽酸麻黃堿和偽麻黃堿具有

7、氨基醇結構，可發(fā)生雙縮脲反應。,②苯烴胺類藥物理化性質,氨基醇雙縮脲反應,一、生物堿類藥物性質與結構分析,鹽酸麻黃堿為左旋體，50mg/ml溶液測定比旋度為－33?～－35.5?；鹽酸偽麻黃堿為右旋體，50mg/ml溶液測定比旋度為＋61.0?～＋62.5?；秋水仙堿為左旋體， 10mg/ml溶液比旋度為－425?～－450?。,②苯烴胺類藥物理化性質,旋光性,一、生物堿類藥物性質與結構分析,②苯烴胺類藥物理化性質,紫外特征吸收,鹽酸偽

8、麻黃堿0.5mg/ml溶液在251、257、263nm波長處有最大吸收；秋水仙堿在243與350nm波長處的吸光度比值為1.70～2.00。,一、生物堿類藥物性質與結構分析,2. 托烷類生物堿,硫酸阿托品（atropine sulfate） 消旋山莨菪堿（raceanisodamine） 氫溴酸東莨菪堿（scopolamine hydrobromide）,①藥物結構,②理化性質,一、生物堿類藥物性質與結構分析,,硫酸阿托品（at

9、ropine sulfate）,①托烷類藥物結構,,無色結晶或白色結晶性粉末，無臭,一、生物堿類藥物性質與結構分析,消旋山莨菪堿（raceanisodamine）,,①托烷類藥物結構,白色結晶或結晶性粉末，無臭，味苦,一、生物堿類藥物性質與結構分析,氫溴酸東莨菪堿（scopolamine hydrobromide）,①托烷類藥物結構,,無色結晶或白色結晶性粉末，無臭，具有微風化性,一、生物堿類藥物性質與結構分析,②托烷類藥物理化性質

10、,溶解性,堿性,穩(wěn)定性,旋光性,莨菪酸反應,一、生物堿類藥物性質與結構分析,②托烷類藥物理化性質,溶解性,,硫酸阿托品水中極易溶解，乙醇中易溶；消旋山莨菪堿在乙醇或鹽酸中易溶，水中溶解；氫溴酸東莨菪堿水中易溶，乙醇中略溶，三氯甲烷中極微溶，乙醚中不溶。,一、生物堿類藥物性質與結構分析,②托烷類藥物理化性質,堿性,,托烷類生物堿氮原子位于五元環(huán)內，為叔氮堿性較強，易與酸成鹽。,一、生物堿類藥物性質與結構分析,,為莨菪醇和莨菪酸組成的酯類

11、物質易于發(fā)生水解。,②托烷類藥物理化性質,穩(wěn)定性,一、生物堿類藥物性質與結構分析,,氫溴酸東莨菪堿為左旋體，50mg/ml溶液比旋度為－24?～－27?；硫酸阿托品和消旋山莨菪堿均為消旋體，無旋光。,②托烷類藥物理化性質,旋光性,一、生物堿類藥物性質與結構分析,,水解生成莨菪酸，可為發(fā)煙硝酸硝化，在堿性醇溶液中呈現(xiàn)深紫色，后轉暗紅色，最后顏色消失（Vatili反應）；亦可與硫酸、重鉻酸鉀在加熱條件下，發(fā)生氧化反應而生成具有苦杏仁味的

12、苯甲醛。,②托烷類藥物理化性質,莨菪酸反應,一、生物堿類藥物性質與結構分析,①藥物結構,②理化性質,3.喹啉類生物堿,硫酸奎寧（quinine sulfate）硫酸奎尼?。╭uinidine sulfate）,一、生物堿類藥物性質與結構分析,硫酸奎寧（quinine sulfate）,白色細微的針狀結晶，輕柔，易壓縮，無臭，味極苦，遇光漸變色,①喹啉類藥物結構,,一、生物堿類藥物性質與結構分析,硫酸奎尼?。╭uinidine su

13、lfate）,①喹啉類藥物結構,,白色細針狀結晶,一、生物堿類藥物性質與結構分析,②喹啉類藥物理化性質,溶解性,堿性,6位含氧的喹啉衍生物,旋光性,熒光特性,一、生物堿類藥物性質與結構分析,溶解性,②喹啉類藥物理化性質,硫酸奎寧，易溶于三氯甲烷-無水乙醇（2∶1）的混合液，水、乙醇、三氯甲烷、乙醚中微溶。硫酸奎尼丁，易溶于沸水，溶于三氯甲烷、乙醇，水中微溶，不溶于乙醚。,一、生物堿類藥物性質與結構分析,堿性,②喹啉類藥物理化性質,均具

14、有喹啉環(huán)和喹核堿，含有二個氮原子喹啉氮為芳香氮，堿性較弱，不可與酸成鹽；喹核氮為脂環(huán)氮，是叔氮，堿性較強，可與酸成鹽1分子硫酸與2分子藥物成鹽。,喹核氮,喹啉氮,一、生物堿類藥物性質與結構分析,②喹啉類藥物理化性質,硫酸奎寧和硫酸奎尼丁是對映異構體，僅喹核堿部分立體結構不同，硫酸奎寧是左旋體，20mg/ml水溶液比旋度為－237?～－244?；硫酸奎尼丁為右旋體，20mg/ml水溶液，比旋度為＋275?～＋290?。,旋光性,

15、一、生物堿類藥物性質與結構分析,②喹啉類藥物理化性質,與氯水、氨水發(fā)生綠奎寧反應。,6位含氧的喹啉衍生物,一、生物堿類藥物性質與結構分析,②喹啉類藥物理化性質,在稀酸條件下，均顯藍色熒光，可用于鑒別。,熒光特性,一、生物堿類藥物性質與結構分析,①藥物結構,②理化性質,4.異喹啉類生物堿,硫酸嗎啡（morphine sullfate）鹽酸嗎啡（morphine hydrochloride）磷酸可待因（codeine phosphate

16、） 鹽酸小檗堿（berberine hydrochloride）,一、生物堿類藥物性質與結構分析,硫酸嗎啡（morphine sullfate）,白色針狀結晶或結晶性粉末，無臭，遇光易變質,①異喹啉類藥物結構,,一、生物堿類藥物性質與結構分析,鹽酸嗎啡（morphine hydrochloride）,白色，有絲光的針狀結晶或結晶性粉末，無臭，遇光易變質,①異喹啉類藥物結構,,一、生物堿類藥物性質與結構分析,磷酸可待因（codei

17、ne phosphate）,白色細微的針狀結晶性粉末，無臭，有風化性,①異喹啉類藥物結構,,一、生物堿類藥物性質與結構分析,鹽酸小檗堿（berberine hydrochloride）,黃色結晶性粉末，無臭，味極苦,①異喹啉類藥物結構,,一、生物堿類藥物性質與結構分析,②異喹啉類生物堿理化性質,溶解性,酸性和堿性,嗎啡生物堿的特征反應,還原性,小檗堿的呈色反應,一、生物堿類藥物性質與結構分析,溶解性,②異喹啉類藥物理化性質,硫酸嗎啡與

18、鹽酸嗎啡，在水中溶解，乙醇中略溶，三氯甲烷和乙醚中不溶；,一、生物堿類藥物性質與結構分析,酸性和堿性,②異喹啉類藥物理化性質,嗎啡結構中具有酚羥基和叔氮基團，具有酸堿兩性，可溶于氫氧化鈉溶液和鹽酸溶液，但堿性略強；可待因分子中酚羥基被甲氧化，僅有叔氮基團，堿性較強，不溶于氫氧化鈉溶液；小檗堿具有α-羥胺結構，能形成醇式、季銨式、醛式互變異構，季銨式最穩(wěn)定，并離子化呈強堿性，可與酸成鹽。,一、生物堿類藥物性質與結構分析,②異喹啉類藥物

19、理化性質,嗎啡A環(huán)酚羥基具有弱還原性，易被氧化；可待因不具有酚羥基，不易氧化此性質可用于區(qū)別嗎啡和可待因。,還原性,一、生物堿類藥物性質與結構分析,②異喹啉類藥物理化性質,與甲醛試液的Marquis反應與鉬硫酸試液的Frohde反應。,嗎啡生物堿的特征反應,一、生物堿類藥物性質與結構分析,②異喹啉類藥物理化性質,游離小檗堿可與丙酮結合為丙酮小檗堿，析出黃色沉淀；220℃加熱可分解為紅色的小檗紅堿；在酸性溶液中加漂白粉（或通氯氣）溶

20、液即顯櫻紅色；與5％沒食子酸水浴加熱，顯翠綠色。,小檗堿的呈色反應,一、生物堿類藥物性質與結構分析,①藥物結構,②理化性質,5.吲哚類生物堿,硝酸士的寧（strychnine nitrate）利血平（reserpine）硫酸長春堿（vinblastine sulfate）硫酸長春新堿（vincristine sulfate）,一、生物堿類藥物性質與結構分析,硝酸士的寧（strychnine nitrate）,,無色針狀結晶或白

21、色結晶性粉末，無臭，味極苦,①吲哚類藥物結構,一、生物堿類藥物性質與結構分析,利血平（reserpine）,白色或淡黃褐色的結晶或結晶性粉末，無臭，幾乎無味，遇光色漸變深,,①吲哚類藥物結構,一、生物堿類藥物性質與結構分析,硫酸長春堿（vinblastine sulfate）,白色或類白色的結晶性粉末，無臭，有引濕性，遇光或熱易變黃,,①吲哚類藥物結構,一、生物堿類藥物性質與結構分析,硫酸長春新堿（vincristine sul

22、fate）,白色或類白色結晶性粉末，無臭，有引濕性，遇光或熱易變黃,①吲哚類藥物結構,,一、生物堿類藥物性質與結構分析,②吲哚類生物堿理化性質,溶解性,堿性,士的寧,旋光性,利血平的還原性,利血平吲哚環(huán)β-位氫,長春堿與長春新堿,一、生物堿類藥物性質與結構分析,溶解性,硝酸士的寧沸水中易溶，水中略溶，微溶于乙醇、三氯甲烷，乙醚中不溶；利血平三氯甲烷中易溶，丙酮或苯中微溶，不溶于水、甲醇、乙醇或乙醚；硫酸長春堿和長春新堿水中易溶，甲醇、三

23、氯甲烷中溶解，乙醇中極微溶解。,,②吲哚類生物堿理化性質,一、生物堿類藥物性質與結構分析,②吲哚類生物堿理化性質,結構中均具有吲哚氮和脂環(huán)氮。 吲哚氮與芳環(huán)共軛，堿性較弱，不與酸成鹽；士的寧結構中脂環(huán)氮為叔氮，堿性較強，可與硝酸成鹽；利血平結構中的脂環(huán)氮由于鄰近基團存在立體位阻效應，堿性較弱，不能與酸成鹽，以游離藥物形式存在；長春堿和長春新堿結構中的脂環(huán)氮有兩個，均具有一定的堿性，故可與一分子二元酸成鹽。,堿 性,一、

24、生物堿類藥物性質與結構分析,②吲哚類生物堿理化性質,利血平為左旋體，10mg/ml三氯甲烷液比旋度為－115?～－131?。,旋光性,一、生物堿類藥物性質與結構分析,②吲哚類生物堿理化性質,用硫酸溶解后，可與重鉻酸鉀反應呈現(xiàn)紫色。,士的寧,一、生物堿類藥物性質與結構分析,②吲哚類生物堿理化性質,易于氧化，產物為黃色的3,4-二去氫利血平，伴有黃綠色熒光，進一步可氧化為3,4,5,6-四去氫利血平，具有藍色熒光。,利血平的還原性,一、生物

25、堿類藥物性質與結構分析,②吲哚類生物堿理化性質,較活潑，可與芳醛發(fā)生縮合反應而顯色。,利血平吲哚環(huán)β-位氫,一、生物堿類藥物性質與結構分析,①藥物結構,②理化性質,6.黃嘌呤類生物堿,咖啡因（caffeine）茶堿（theophylline）氨茶堿（aminophylline）,一、生物堿類藥物性質與結構分析,咖啡因（caffeine）,白色或帶極微黃綠色、有絲光的針狀結晶，無臭，味苦，有風化性,①黃嘌呤類藥物結構,,一、生物堿類

26、藥物性質與結構分析,茶堿（theophylline）,白色結晶性粉末，無臭、味苦,①黃嘌呤類藥物結構,,一、生物堿類藥物性質與結構分析,氨茶堿（aminophylline）,白色或微黃色的顆?；蚍勰?，微有氨臭，味苦,①黃嘌呤類藥物結構,,一、生物堿類藥物性質與結構分析,②黃嘌呤類生物堿理化性質,溶解性,酸性和堿性,黃嘌呤生物堿的紫脲酸銨反應,一、生物堿類藥物性質與結構分析,溶解性,咖啡因在熱水或三氯甲烷中易溶，在水、乙醇或丙酮中略溶

27、，乙醚中極微溶；茶堿在乙醇、三氯甲烷中微溶，水中極微溶，氫氧化鉀或氨溶液中易溶；氨茶堿在水中溶解，乙醚中不溶。,,②黃嘌呤類生物堿理化性質,一、生物堿類藥物性質與結構分析,酸性和堿性,咖啡因不顯酸性；茶堿7位N-H可解離顯酸性，可與乙二胺成氨-茶堿；黃嘌呤環(huán)上N-9堿性極弱，近中性，游離堿可供藥用,,②黃嘌呤類生物堿理化性質,一、生物堿類藥物性質與結構分析,黃嘌呤生物堿的紫脲酸銨反應,咖啡因和茶堿具有黃嘌呤結構，與鹽酸和氯酸鉀水浴蒸

28、干，遇氨氣生成四甲基紫脲酸銨，顯紫色，加氫氧化鈉紫色消失。,,②黃嘌呤類生物堿理化性質,一、生物堿類藥物性質與結構分析,（一）生物堿一般鑒別試驗,1. 熔點測定,2. 生物堿顯色反應,3. 生物堿沉淀反應,4. 紫外分光光度法,5. 紅外分光光度法,6. 薄層色譜法,二、生物堿類藥物的鑒別試驗,固體生物堿類藥物大多具有一定的熔點，某些生物堿藥物采用測定游離生物堿熔點的鑒別方法,1. 熔點測定,（一）生物堿一般鑒別試驗,二、生物堿類藥物

29、的鑒別試驗,,磷酸可待因的鑒別,取本品約0.2g，加水4ml溶解后，在不斷攪拌下滴加20％氫氧化鈉溶液至出現(xiàn)白色沉淀，用玻璃棒摩擦器壁使沉淀完全，濾過；沉淀用水洗凈，在105℃干燥1小時，測定熔點為154～158℃。,二、生物堿類藥物的鑒別試驗,常用顯色試劑有濃硫酸、濃硝酸、鉬硫酸、礬硫酸、甲醛-硫酸、硫酸鈰銨等顯色反應的機制可能是脫水、氧化、縮合等。,（一）生物堿一般鑒別試驗,2. 生物堿顯色反應,二、生物堿類藥物的鑒別試驗,,中國

30、藥典（2010年版）中硝酸士的寧鑒別,取硝酸士的寧0.5mg，置蒸發(fā)皿中，加硫酸1滴溶解后，加重鉻酸鉀的結晶一小粒，周圍即顯紫色,二、生物堿類藥物的鑒別試驗,常見生物堿的顯色鑒別試驗,茶堿磷酸可待因鹽酸小檗堿利血平硝酸士的寧,硫酸長春新堿硫酸長春堿硫酸奎寧、奎尼丁硝酸毛果蕓香堿,表1,表2,二、生物堿類藥物的鑒別試驗,常見生物堿的顯色鑒別試驗表1,二、生物堿類藥物的鑒別試驗,常見生物堿的顯色鑒別試驗表2,二、生物堿類藥物的

31、鑒別試驗,常用的生物堿沉淀劑有：碘化鉍鉀、碘化汞鉀、碘-碘試液、二氯化汞等由于反應專屬性不高，中國藥典（2010年版）僅對個別生物堿類藥物的鑒別使用此類反應,（一）生物堿一般鑒別試驗,3. 生物堿沉淀反應,二、生物堿類藥物的鑒別試驗,生物堿類藥物大都含有芳環(huán)、芳雜環(huán)以及共軛雙鍵結構，具有特征的紫外吸收，可供鑒別。,（一）生物堿一般鑒別試驗,4. 紫外分光光度法,中國藥典（2010年版）紫外鑒別方法,常見生物堿類藥物的紫外鑒別,二、生物

32、堿類藥物的鑒別試驗,中國藥典（2010年版）紫外鑒別方法,（1）對比吸收光譜的特征參數(shù)。（2）對比吸收光譜的一致性。（3）對比吸光度比值的一致性。,二、生物堿類藥物的鑒別試驗,常見生物堿類藥物的紫外鑒別,二、生物堿類藥物的鑒別試驗,除硝酸士的寧、磷酸奎尼丁外均采用此法鑒別。,（一）生物堿一般鑒別試驗,5. 紅外分光光度法,二、生物堿類藥物的鑒別試驗,（一）生物堿一般鑒別試驗,6. 薄層色譜法,【實例分析】消旋山莨菪堿的鑒別,【實例分

33、析】消旋山莨菪堿的鑒別,分析,①展開劑中添加堿性的氨溶液,②顯色方法,二、生物堿類藥物的鑒別試驗,,（一）生物堿一般鑒別試驗,6. 薄層色譜法,【實例分析】消旋山莨菪堿的鑒別,藥典方法,取本品與消旋山莨菪堿對照品，分別加甲醇制成每1ml中含1mg的溶液，照薄層色譜法，吸取上述溶液各10μl，分別點于同一硅膠GF254薄層板上，用甲醇-丙酮-乙醇-濃氨液（4∶5∶0.6∶0.4）為展開劑，展開后晾干，置紫外燈（254nm）下檢視，供試品溶

34、液所顯主斑點的位置應與對照溶液的主斑點相同；,,,二、生物堿類藥物的鑒別試驗,中和硅膠的弱酸性，防止生物堿在薄層板上吸附太牢，導致嚴重拖尾除氨溶液外，還可使用乙二胺,①展開劑中添加堿性的氨溶液,二、生物堿類藥物的鑒別試驗,采用GF254的熒光背景普通硅膠板，可利用生物堿自身的顏色、熒光性質以及與生物堿沉淀劑的顯色反應顯色,②顯色方法,二、生物堿類藥物的鑒別試驗,（二）生物堿特征鑒別試驗,1.具有氨基醇結構生物堿的特征反應,2.托烷生

35、物堿的特征反應,3. 6位含氧喹啉衍生物的特征反應,4.嗎啡生物堿的特征反應,5.吲哚生物堿的特征反應,6.黃嘌呤類生物堿的特征反應,二、生物堿類藥物的鑒別試驗,（二）生物堿特征鑒別試驗,1.具有氨基醇結構生物堿的特征反應,雙縮脲反應,中國藥典（2010年版）鹽酸麻黃堿的鑒別,反應原理,方程式,二、生物堿類藥物的鑒別試驗,反應原理,Cu2+與仲胺基形成紫堇色配位化合物，溶于乙醚層顯紫紅色，四水配合物溶于水層呈藍色。,無水配合物及一水配合

36、物,四水配合物,乙醚,水層,二、生物堿類藥物的鑒別試驗,雙縮脲反應方程式,二、生物堿類藥物的鑒別試驗,,中國藥典（2010年版）鹽酸麻黃堿的鑒別,取鹽酸麻黃堿約10mg，加水1ml溶解后，加硫酸銅試液2滴與20％的氫氧化鈉溶液1ml，即顯藍紫色；加乙醚1ml，振搖后，放置，乙醚層即顯紫紅色，水層變?yōu)樗{色。,二、生物堿類藥物的鑒別試驗,2.托烷生物堿的特征反應,莨菪酸，與發(fā)煙硝酸和醇制氫氧化鉀發(fā)生特征維他立（Vitali）反應。中國藥典

37、（2005年版）對氫溴酸東莨菪堿、消旋山莨菪堿、硫酸阿托品均采用此法鑒別,（二）生物堿特征鑒別試驗,Vitali反應,中國藥典附錄III-Vitali反應,反應原理,方程式,二、生物堿類藥物的鑒別試驗,Vitali反應原理,酸性條件下，托烷類生物堿酯鍵水解，生成莨菪酸，莨菪酸為硝酸硝化為三硝基衍生物，在醇制氫氧化鉀堿性條件下，轉變?yōu)樽仙孽臀镔|。,二、生物堿類藥物的鑒別試驗,Vitali方程式,二、生物堿類藥物的鑒別試驗,,中國藥典附

38、錄III-Vitali反應,取供試品約10mg，加發(fā)煙硝酸5滴，置水浴上蒸干，得黃色的殘渣，放冷，加乙醇2～3滴濕潤，加固體氫氧化鉀一小粒，即顯深紫色。,二、生物堿類藥物的鑒別試驗,奎寧和奎尼丁在酸性溶液中，與溴水（或氯水）及氨水發(fā)生綠奎寧反應中國藥典（2010年版）采用此法鑒別上述藥物。,（二）生物堿特征鑒別試驗,3. 6位含氧喹啉衍生物的特征反應,綠奎寧（Thalleioquin）反應,中國藥典（2010年版）硫酸奎寧鑒別,方程

39、式,二、生物堿類藥物的鑒別試驗,,中國藥典（2010年版）硫酸奎寧鑒別,取本品約20mg，加水20ml溶解后，分取溶液5ml，加溴試液3滴與氨試液1ml，即顯翠綠色,二、生物堿類藥物的鑒別試驗,綠奎寧反應方程式,（翠綠色）,二、生物堿類藥物的鑒別試驗,（二）生物堿特征鑒別試驗,4. 嗎啡生物堿的特征反應,（1） Marquis反應,（2）Frohde反應,（3）還原反應,二、生物堿類藥物的鑒別試驗,,嗎啡為含有酚羥基的異喹啉類生物堿，可

40、與甲醛－硫酸反應，產物為具有特征紫紅色的醌式化合物。,（1） Marquis反應,方法：取本品約1mg，加甲醛硫酸試液1滴，即顯紫堇色,二、生物堿類藥物的鑒別試驗,嗎啡與鉬硫酸試液發(fā)生顯色反應，呈紫色-藍色-棕綠色的漸變。靈敏度為0.05μg。,（2）Frohde反應,,方法：取本品約1mg，加鉬硫酸試液0.5ml，即顯紫色，繼變?yōu)樗{色，最后變?yōu)樽鼐G色。,,,,二、生物堿類藥物的鑒別試驗,（3）還原反應,原理,反應式,方法,二、生物堿類

41、藥物的鑒別試驗,原理,嗎啡酚羥基鄰位C2具有弱還原性，鐵氰化鉀試液可將其氧化生成偽嗎啡，自身被還原為亞鐵氰化鉀，再與三氯化鐵反應生成普魯士藍（亞鐵氰化鐵）,二、生物堿類藥物的鑒別試驗,反應式,二、生物堿類藥物的鑒別試驗,返 回,,方法,方法：取本品約1mg，加水1ml溶解后，加稀鐵氰化鉀試液1滴，即顯藍綠色（與可待因區(qū)別）,二、生物堿類藥物的鑒別試驗,利血平吲哚環(huán)上的β-氫原子較活潑，可與香草醛縮合顯玫瑰紅色，與對-二甲氨基苯甲醛縮合顯

42、綠色,（二）生物堿特征鑒別試驗,5.吲哚生物堿的特征反應,官能團反應,二、生物堿類藥物的鑒別試驗,黃嘌呤生物堿與鹽酸及氯酸鉀加熱后，咪唑環(huán)開環(huán)，遇氨氣即縮合生成四甲基紫脲酸銨，顯紫色,（二）生物堿特征鑒別試驗,6. 黃嘌呤類生物堿的特征反應,紫脲酸銨反應,方程式,反應方法,二、生物堿類藥物的鑒別試驗,紫脲酸銨方程式,二、生物堿類藥物的鑒別試驗,,反應方法,方法：取本品約10mg，加鹽酸1ml與氯酸鉀0.1g，置水浴上蒸干，遺留淺紅色的殘

43、渣，遇氨氣即變?yōu)樽仙辉偌託溲趸c試液數(shù)滴，紫色即消失,二、生物堿類藥物的鑒別試驗,【相關鏈接】無機酸根鑒別試驗 藥典附錄III（一般鑒別實驗）,如硝酸士的寧應顯硝酸鹽的鑒別反應鹽酸麻黃堿應顯氯化物的鑒別反應硫酸阿托品應顯硫酸鹽的鑒別反應磷酸川芎嗪應顯磷酸鹽的鑒別反應等,二、生物堿類藥物的鑒別試驗,1.氯化物的鑒別反應,2.硫酸鹽的鑒別反應,3.硝酸鹽的鑒別反應,4.溴化物的鑒別反應,5.磷酸鹽的鑒別反應,無機酸根鑒別試驗

44、 藥典附錄III（一般鑒別實驗）,二、生物堿類藥物的鑒別試驗,,①取供試品試液，加硝酸使成酸性后，加硝酸銀試液，即生成白色凝乳狀沉淀；分離，沉淀加氨試液即溶解，再加硝酸，沉淀復生成。如供試品為生物堿或其他有機堿的鹽酸鹽，須先加氨試液使成堿性，將析出的沉淀濾過除去，取濾液進行試驗。②取供試品少量，置試管中，加等量的二氧化錳，混勻，加硫酸濕潤，緩緩加熱，即發(fā)生氯氣，能使?jié)駶櫟牡饣浀矸墼嚰堬@藍色,（三）無機酸根鑒別試驗,1.氯化物的鑒別反

45、應,二、生物堿類藥物的鑒別試驗,,①取供試品溶液，滴加氯化鋇試液，即生成白色沉淀；分離，沉淀在鹽酸或硝酸中均不溶解。②取供試品溶液，滴加醋酸鉛試液，即生成白色沉淀；分離，沉淀在醋酸銨試液或氫氧化鈉試液中溶解。③取供試品溶液，加鹽酸，不生成白色沉淀（與硫代硫酸鹽區(qū)別）,（三）無機酸根鑒別試驗,2.硫酸鹽的鑒別反應,二、生物堿類藥物的鑒別試驗,,①取供試品溶液，置試管中，加等量的硫酸，小心混合，冷后，沿管壁加硫酸亞鐵試液，使成兩液層，接界

46、面顯棕色。②取供試品溶液，加硫酸與銅絲，加熱，即發(fā)生紅棕色的蒸汽。③取供試品溶液，滴加高錳酸鉀試液，紫色不應褪去（與亞硝酸鹽區(qū)別）,（三）無機酸根鑒別試驗,3.硝酸鹽的鑒別反應,二、生物堿類藥物的鑒別試驗,,①取供試品溶液，加硝酸銀試液，即生成淡黃色凝乳狀沉淀；分離，沉淀能在氨試液中微溶，但在硝酸中幾乎不溶。②取供試品溶液，滴加氯試液，溴即游離，加三氯甲烷振搖，三氯甲烷層顯黃色或紅棕色,（三）無機酸根鑒別試驗,4.溴化物的鑒別反應,二、

47、生物堿類藥物的鑒別試驗,,①取供試品的中性溶液，加硝酸銀試液即生成淺黃色沉淀；分離，沉淀在氨試液或稀硝酸中均易溶解。②取供試品溶液，加氯化銨鎂試液，即生成白色結晶性沉淀。③取供試品溶液，加鉬酸銨試液與硝酸后，加熱即生成黃色沉淀；分離，沉淀能在氨試液中溶解。,（三）無機酸根鑒別試驗,5.磷酸鹽的鑒別反應,二、生物堿類藥物的鑒別試驗,,雙縮脲反應,藍紫色,鹽酸麻黃堿,,Vitali反應,,,紫色,硫酸阿托品,,硫酸奎寧,翠綠色,綠奎寧反應,

48、,,鹽酸嗎啡,Marquis反應,紫紅色,,硝酸士的寧,,,硫酸，重鉻酸鉀,紫色,－,二、生物堿類藥物的鑒別試驗,1. 利用旋光性差異,檢查硫酸阿托品中的莨菪堿莨菪堿為左旋體，而阿托品無旋光性，要求硫酸阿托品供試品溶液（50mg/ml）的旋光度不得超過－0.40°,三、生物堿類藥物的特殊雜質檢查,檢查硫酸阿托品中的其它生物堿（東莨菪堿、山莨菪堿和樟柳堿等）堿性較阿托品弱，鹽酸鹽可為氨試液置換為游離生物堿，不溶于水，鹽酸阿托

49、品不游離，仍溶解于水。取供試品溶液，加氨試液2ml，振搖，不得立即發(fā)生渾濁。,2. 利用溶解性差異,三、生物堿類藥物的特殊雜質檢查,3. 利用光學性質差異,檢查利血平中的氧化產物。利血平氧化變質，產物具有熒光。將供試品置紫外光燈（365nm）下檢視,不得顯明顯的熒光。,三、生物堿類藥物的特殊雜質檢查,（二）利用雜質和藥物化學性質區(qū)別進行檢查,1.中國藥典（2010年版）鹽酸嗎啡中特殊雜質檢查,2.中國藥典（2010年版）硝酸士的寧

50、中馬錢子堿的檢查,三、生物堿類藥物的特殊雜質檢查,1.中國藥典（2005年版）鹽酸嗎啡中特殊雜質檢查,阿撲嗎啡,罌粟酸,三、生物堿類藥物的特殊雜質檢查,阿撲嗎啡,利用阿撲嗎啡具有還原性，產物在水溶液中為綠色，乙醚中為寶石紅色，而藥物沒有此性質檢查時，規(guī)定乙醚層不得顯紅色，水層不得顯綠色，以此控制阿樸嗎啡限量；,,,三、生物堿類藥物的特殊雜質檢查,罌粟酸,利用罌粟酸可與三氯化鐵在微酸性條件下生成紅色的罌粟酸鐵，嗎啡沒有此現(xiàn)象要求在加入

51、2滴三氯化鐵試液后，溶液不得顯紅色。,三、生物堿類藥物的特殊雜質檢查,（三）利用雜質和藥物色譜學行為差異進行檢查,1.薄層色譜法,2.高效液相色譜法,3.【實例分析】,三、生物堿類藥物的特殊雜質檢查,1.薄層色譜法檢查“特殊雜質”,中國藥典（2010年版）對藥物中“其他生物堿”的檢查,①雜質對照品法，如氫溴酸山莨菪堿中其它生物堿的檢查。②供試品溶液的自身稀釋對照法，如硫酸奎寧中其它金雞鈉堿的檢查。③雜質對照品法與供試品溶液自身稀釋對

52、照法并用，如鹽酸嗎啡中其它生物堿的檢查。,三、生物堿類藥物的特殊雜質檢查,高效液相色譜法具有分離效能高、專屬性強、檢測靈敏等特點，其在雜質檢查上的應用，在近版藥典中有逐漸增加的趨勢，如中國藥典（2010年版）對長春新堿中其他生物堿、磷酸川芎嗪中有關物質的檢查。,2.高效液相色譜法檢查特殊雜質,三、生物堿類藥物的特殊雜質檢查,3.【實例分析】生物堿中特殊雜質色譜法檢查,薄層色譜檢查,高效液相色譜法檢查,硫酸奎寧－其它金雞納堿,鹽酸嗎啡－

53、其它生物堿,薄層色譜法討論,硫酸長春新堿中有關物質的檢查,磷酸川芎嗪中有關物質檢查,三、生物堿類藥物的特殊雜質檢查,附表-藥典中常見生物堿特殊雜質及檢查方法,硫酸阿托品氫溴酸東莨菪堿鹽酸偽麻黃堿硫酸奎寧硫酸奎尼丁,表1,表2,表3,鹽酸嗎啡硫酸嗎啡磷酸可待因鹽酸小檗堿硝酸士的寧利血平,硫酸長春新堿硫酸長春堿咖啡因茶堿氨茶堿硝酸毛果蕓香堿磷酸川芎嗪,三、生物堿類藥物的特殊雜質檢查,藥典中常見生物堿特殊雜質及檢

54、查方法 表1,三、生物堿類藥物的特殊雜質檢查,藥典中常見生物堿特殊雜質及檢查方法 表2,三、生物堿類藥物的特殊雜質檢查,藥典中常見生物堿特殊雜質及檢查方法 表3,三、生物堿類藥物的特殊雜質檢查,,,（一）非水滴定法,（二）提取酸堿滴定法,中國藥典(2010年版)常用生物堿藥物含量測定方法一覽表,（三）酸性染料比色法,（四）紫外分光光度法,（五）高效液相色譜法,四、生物堿類藥物的含量測定,（一）非水滴定法,1. 高氯酸法基本原理,2

55、. 一般方法,3. 滴定注意事項,【實例分析】,【相關鏈接】,四、生物堿類藥物的含量測定,1.高氯酸滴定法基本原理,高氯酸置換出與生物堿結合的較弱的酸的反應。,BH+·A-：表示生物堿鹽類； HA：表示被置換出的弱酸；,四、生物堿類藥物的含量測定,不同HA在醋酸中的酸性情況如示： HClO4 ＞ HBr ＞ H2SO4 ＞ HCl＞ HSO4－ ＞ HNO3 ＞ H3PO4及其它弱酸,四、生物堿類藥物的含

56、量測定,,2. 一般方法,除另有規(guī)定外，精密稱取供試品適量[消耗高氯酸滴定液（0.1mol/L）約8ml]，加冰醋酸10～30ml使溶解，加各品種項下規(guī)定的指示液1～2滴，用高氯酸滴定液（0.1mol/L）滴定。終點顏色應以電位滴定時的突躍點為準，并將滴定結果用空白試驗校正。,,四、生物堿類藥物的含量測定,3. 滴定注意事項,（1）方法的適用對象,（2）不同酸根的影響,,③硝酸鹽,①磷酸鹽及有機酸鹽,②氫鹵酸鹽,④硫酸鹽,（3）滴定終點

57、的指示方法,（4）滴定劑的注意事項,四、生物堿類藥物的含量測定,（1）方法的適用對象,適于Kb<10-8的有機堿、有機酸的堿金屬鹽的含量測定。Kb為10-8～10-10，宜選冰醋酸作溶劑；Kb為10-10～10-12時，選用冰醋酸與醋酐的混合溶劑；Kb<10-12，選擇醋酐作溶劑。如咖啡因（Kb＝10-14.15）的含量測定選擇醋酸和醋酐的混合溶劑。,四、生物堿類藥物的含量測定,（2）不同酸根的影響,①磷酸鹽及有機酸

58、鹽,在冰醋酸中酸性極弱，不干擾高氯酸滴定，故可直接滴定,四、生物堿類藥物的含量測定,（2）不同酸根的影響,②氫鹵酸鹽,在醋酸中酸性較強，反應不能完全藥典規(guī)定生物堿的氫鹵酸鹽不可直接滴定需加入5％醋酸汞冰醋酸試液3～5ml后，使其生成在醋酸溶劑中難解離的鹵化汞，再進行滴定，此時可反應完全 Hg(Ac) 2 ＋ 2BH+·X- → HgX2 + 2B·HX,四、生物堿類藥物的含量測定,（2）不同酸根的影

59、響,③硝酸鹽,可直接滴定硝酸有較強的氧化性，可氧化指示劑結晶紫硝酸鹽不宜用結晶紫作指示劑，改用電位法指示終點。電位滴定時用玻璃電極作為指示電極，飽和甘汞電極（玻璃套管內裝氯化鉀的飽和無水甲醇溶液）為參比電極,四、生物堿類藥物的含量測定,（2）不同酸根的影響,④硫酸鹽,硫酸在醋酸中酸性較弱，是一元酸只能被置換為HSO4－，僅滴定至硫酸氫鹽為止。當生物堿的硫酸鹽分子中具有不同堿性的氮原子時，反應的定量關系需格外注意,四、生物堿類藥

60、物的含量測定,（3）滴定終點的指示方法,終點判定有電位法和指示劑法二種。硝酸鹽類采用電位法其余生物堿、有機堿性藥物的終點判定多使用指示劑法。常用指示劑為結晶紫,四、生物堿類藥物的含量測定,結晶紫終點指示,不同的堿及鹽，終點顏色有較大差異。終點顏色呈現(xiàn)的變化為紫、藍、藍綠、綠、黃。一般堿性較強的藥物，終點為藍色，如硫酸阿托品；堿性中等的藥物，為藍綠色或綠色，如硫酸奎寧；堿性較弱的則以黃綠或黃色為終點顏色，如咖啡因,,,,四、

61、生物堿類藥物的含量測定,常見生物堿非水滴定法終點判定,四、生物堿類藥物的含量測定,（4）滴定劑的注意事項,①冰醋酸具有揮發(fā)性，且體積膨脹系數(shù)較大，長期貯存或溫度變化均影響濃度，故高氯酸的醋酸滴定液需根據溫度變化校正，使用時與標定時的溫度差超過10℃則需重新標定；②冰醋酸和高氯酸中含有微量水分，可干擾突躍，配制高氯酸滴定液時需加入計算量的醋酐；③濃高氯酸與醋酐混合會引起爆炸，配制時應將高氯酸用冰醋酸稀釋后，再加醋酐,四、生物堿類藥物的

62、含量測定,（一）非水酸堿滴定法,【實例分析】,中國藥典（2010）鹽酸麻黃堿原料的含量測定,中國藥典（2010）常見生物堿硫酸鹽的含量測定,硫酸阿托品原料的含量測定,硫酸奎寧的含量測定,硫酸奎寧片的含量測定,硫酸奎寧含量測定小結,四、生物堿類藥物的含量測定,,方法：取本品約0.15g，精密稱定，加冰醋酸10ml，加熱溶解后，加醋酸汞試液4ml與結晶紫指示液1滴，用高氯酸滴定液（0.1mol/L）滴定至溶液顯翠綠色，并將滴定的結果用空白試

63、驗校正 1mol的鹽酸麻黃堿與1mol的高氯酸反應，每1ml高氯酸滴定液（0.1mol/L）相當于20.17mg的C10H15NO·HCl。,中國藥典鹽酸麻黃堿原料的含量測定,,四、生物堿類藥物的含量測定,四、生物堿類藥物的含量測定,,反應式,含量計算,含量（％）＝,,,四、生物堿類藥物的含量測定,V：供試液消耗高氯酸的體積；V0: 空白試驗驗消耗的高氯酸的體積；F: 高氯酸（0.1mol/L）濃度校正系數(shù)；W：供試品

64、取量。,,硫酸阿托品原料的含量測定,方法：取本品約0.5g，精密稱定，加冰醋酸與醋酐各10ml溶解后，加結晶紫指示液1～2滴，用高氯酸滴定液(0.1mol/L)滴定至溶液顯純藍色，并將滴定的結果用空白試驗校正。 硫酸鹽在醋酸中僅滴定至硫酸氫鹽，1mol的硫酸阿托品可與1mol的高氯酸反應，每1ml高氯酸滴定液(0.1 mol/L)相當于67.68mg的(C17H23NO3)2·H2SO4。,(C17H23NO3)2

65、3;H2SO4 ＋HClO4 →C17H23NO3H+·ClO4－ ＋C17H23NO3H+·HSO4－,,,四、生物堿類藥物的含量測定,硫酸奎寧的含量測定,藥典方法,方程式,分析,四、生物堿類藥物的含量測定,,藥典方法,取本品約0.2g，精密稱定，加冰醋酸10ml溶解后，加醋酐5ml與結晶紫指示液l～2滴，用高氯酸滴定液(0.1mol/L)滴定至溶液顯藍綠色，并將滴定的結果用空白試驗校正。,四、生物堿類藥物的含量測

66、定,分析,硫酸奎寧為2分子喹核堿與1分子硫酸的鹽，高氯酸只能與其中1個喹核氮發(fā)生反應，置換出硫酸氫根；奎寧具有的喹啉氮，在醋酸溶劑下，可為高氯酸滴定,,四、生物堿類藥物的含量測定,方程式,(C20H24N2O2)2·H2SO4 ＋ 3HClO4 →(C20H24N2O2·2H+)·2ClO4－ ＋ (C20H24N2O2·2H+)·HSO4－·ClO4－

67、 喹啉氮被高氯酸滴定 喹核堿硫酸鹽被高氯酸滴定,滴定時，1mol的硫酸奎寧可與3mol的高氯酸反應。每1ml的高氯酸滴定液(0.1mol/L)相當于24.90mg的C20H24N2O2)2·H2SO4。,,四、生物堿類藥物的含量測定,硫酸奎寧片的含量測定,,藥典方法,方程式,分析,四、生物堿類藥物的含量測定,,藥典方法,取本品10片，除去包衣后，精密稱定，研細，精密稱取適量(約相當于硫酸

68、奎寧0.3g)，置分液漏斗中，加氯化鈉0.5g與0.1mol/L氫氧化鈉溶液10ml，混勻，精密加三氯甲烷50ml，振搖10分鐘，靜置，分取三氯甲烷液，用干燥濾紙濾過，精密量取續(xù)濾液25ml，加醋酐5m1與二甲基黃指示液2滴，用高氯酸滴定液（0.1mol/L）滴定至溶液顯玫瑰紅色，并將滴定的結果用空白試驗校正,四、生物堿類藥物的含量測定,分析,硫酸奎寧片需采用堿化及三氯甲烷提取以與賦型劑等干擾成分分離。強堿溶液使其堿化為奎寧游離堿，1

69、分子硫酸奎寧生成2分子奎寧游離堿，喹啉氮和喹核氮此時均可與高氯酸反應，1mol的硫酸奎寧可消耗4mol的高氯酸,,四、生物堿類藥物的含量測定,方程式,(C20H24N2O2)2·H2SO4 ＋ 2NaOH → 2C20H24N2O2 ＋