29607.半滑舌鰨(cynoglossussemilaevis)tlr9及其信號傳導相關基因的克隆與表達

1、中國海洋大學博士學位論文半滑舌鰨（Cynoglossussemilaevis）TLR9及其信號傳導相關基因的克隆與表達姓名：于燕申請學位級別：博士專業(yè)：遺傳學指導教師：張全啟20090601列由23bp5’UTR，342bp3’UTR以及3186bpORF組成，其ORF編碼1062個aa，包含胞外區(qū)14個富含亮氨酸的基序(LRRmotif)，跨膜區(qū)(TM)和胞內(nèi)TIR結構域(TIRdomain)。csTLR9與金頭鯛和牙鲆TLR9同源性

2、高于60％。RealtimePCR結果顯示esTLR9廣泛表達于各個組織中，尤其是脾臟和性腺中表達量很高。免疫刺激試驗表明，注射滅活鰻弧菌后，半滑舌鰨脾臟和頭腎中TLR9的表達量沒有顯著變化。發(fā)育階段TLR9表達分析發(fā)現(xiàn)母源性TLR9mRNA的存在，且在變態(tài)時期TLR9表達量顯著降低，暗示TLR9可能參與半滑舌鰨個體發(fā)育，在其發(fā)育過程中發(fā)揮了重要的作用。雖然存在物種間差異，但csTLR9無論是在序列上，還是在表達方面都表現(xiàn)出與其他魚類及

3、哺乳動物的相似性。2半滑舌鰨MyD88基因的克隆及表達分析MyD88是IL1R／TLR超家族胞內(nèi)信號傳導中重要的接頭蛋白。半滑舌鰨MyD88基因全長2855bp，包含5個外顯子，4個內(nèi)含子；其eDNA包含110bp5’UTR，576bP3UTR和編碼285aa的編碼區(qū)。csMyD88與其他魚類及哺乳類MyD88序列相似性很高，與牙鲆MyD88相似性高于70％。csMyD88包含一個TIR結構域，一個致死域(DD)及連接二者的中間區(qū)域(I

4、D)。RT—PCR結果表明csMyD88在不同組織中的表達情況與TLR9類似，在所檢測的12種組織中csMyD88都有表達，尤其在脾臟和性腺中表達水平很高。腹腔注射滅活鰻弧菌后，半滑舌鰨脾臟和頭腎中MyD88的表達水平顯著升高。在半滑舌鰨的發(fā)育過程中，csMyD88的表達量表現(xiàn)出隨發(fā)育時期而變化的特征。esMyD88與其他脊椎動物在序列上及表達特征上的相似性，暗示脊椎動物MyD88在功能及作用機制上的保守性。3半滑舌鰨lRAK4基因的克

5、隆及表達分析IRAK4在TLR／IL1R超家族信號轉導中具有重要的地位。IRAK4通過磷酸化IRAKI的KD區(qū)，激活IRAKl，將信號向下傳導。通過拼接核心片段、3’及5’末端得到cslRAK4cDNA全序列，包括5’UTR168bp，3UTR580bp以及ORF1401bp。SMART分析表明cslRAK4包含一個典型STKc結構域(serine／threoninekinasescatalyticdomain)和一個致死域。cslRA