半滑舌鰨性別相關(guān)基因P450芳香化酶、FTZ-F1和DMRT1基因克隆及表達(dá)分析.pdf

1、中國(guó)海洋大學(xué)博士學(xué)位論文半滑舌鰨性別相關(guān)基因P450芳香化酶、FTZF1和DMRT1基因克隆及表達(dá)分析姓名：鄧思平申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：博士專(zhuān)業(yè)：細(xì)胞生物學(xué)指導(dǎo)教師：陳松林20070601半滑舌鰨性別相關(guān)基因P450芳香化酶、FTZ—FI和DMRTI基因克隆及表達(dá)分析的性別逆轉(zhuǎn)。2半滑舌鰨性腺型芳香化酶(tsP450aromA)基因和腦型芳香化酶(tsP450aromB)基因的克隆及表達(dá)分析采用同源克隆策略和RACE的方法，分別從半滑舌鰨卵巢和

2、腦中分離了性腺型芳香化酶(tsP450aromA)和腦型芳香化酶(tsP450aromB)。tsP450aromAcDNA全長(zhǎng)2266bp，該基因編碼了526個(gè)氨基酸。氨基酸序列和系統(tǒng)發(fā)生分析表明，tsP450aromA屬于卵巢型P450aromA，tsP450aromA的氨基酸序列與其它魚(yú)類(lèi)P450aromA的同源性較高(59％～77％)，與腦型P450aromB的同源性較低(56％～607％)。Genomewalking獲得的啟動(dòng)子

3、序列分析發(fā)現(xiàn)具TATA框和潛在的轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)因子，包括半個(gè)雌激素應(yīng)答元件(EREhalo，兩個(gè)Ad4bindingmotifs。RT—PCR分析表明=tsP450aromA的表達(dá)具有明顯組織特異性，tsP450aromA只在性腺中表達(dá)，且卵巢中表達(dá)量遠(yuǎn)高于精巢，而在雌雄魚(yú)的其它組織中都不表達(dá)。在性腺發(fā)育過(guò)程中，精巢和卵巢中的芳香化酶的表達(dá)都逐漸增強(qiáng)，但卵巢中的表達(dá)量始終高于精巢。經(jīng)過(guò)甲基睪酮浸浴處理和高溫誘導(dǎo)半滑舌鰨由雌性性逆轉(zhuǎn)為雄性后，性

4、腺中芳香化酶的表達(dá)量降低。這些結(jié)果表明tsP450aroIIIA參與了半滑舌鰨的性腺發(fā)育和性別決定過(guò)程。(tsP450aromB)cDNA全長(zhǎng)2184bp，該基因編碼了498個(gè)氨基酸。氨基酸序列和系統(tǒng)發(fā)生分析表明，tsP450aromB屬于腦型P450arom，tsP450aromB的氨基酸序列與其它硬骨魚(yú)類(lèi)的腦型P450aromB的同源性較高(483％～661％)，與性腺型P450aroma的同源性較低(342％～49。9％)，與自身

5、的性腺型芳香化酶同源性為451％。RT—PCR分析表明：tsP450aromBmRNA的表達(dá)具有明顯組織特異性，tsP450aromB只在性腺、腦、鰓、皮膚中表達(dá)，且腦中表達(dá)量遠(yuǎn)高于性腺，而在雌雄魚(yú)的其它組織中都不表達(dá)。經(jīng)過(guò)甲基睪酮浸浴處理和高溫誘導(dǎo)半滑舌鰨由雌性性反轉(zhuǎn)為雄性后，腦中tsP450aromB的表達(dá)量降低，這些結(jié)果表明tsP450aromB參與了半滑舌鰨的性腺分化和性別決定過(guò)程。3半滑舌鰨FTZFI(tsFTZF1)基因的克