聚乙二醇-聚（D，L）乳酸嵌段共聚物載逆轉(zhuǎn)劑FG020326納米膠束增加藥效及其機(jī)理研究.pdf

1、本實(shí)驗(yàn)的目的是研究。PEDLLA-FG020326藥效學(xué)的改變及可能機(jī)制。 方法與結(jié)果: 1.PEDLLA-FG020326和FG020326體外逆轉(zhuǎn)MDR活性的比較KBv200細(xì)胞為過度表達(dá)P-gp的具有典型MDR表型的人口底癌耐藥細(xì)胞株，KB細(xì)胞為其敏感株。KBv200較KB細(xì)胞對VCR耐藥約99倍，對Dox耐藥約16倍。 本課題通過MTT法比較PEDLLA-FG020326和FG020326對KB及KBv2

2、00細(xì)胞對抗癌藥物長春新堿(VCR)和阿霉素(Dox)敏感性的影響。結(jié)果顯示PEDLLA-FG020326、FG020326及PEDLLA在50μmol/L時(shí)對KBv200和KB細(xì)胞均無明顯的細(xì)胞毒作用。PEDLLA-FG020326與FG020326相比，能顯著增加VCR或Dox對KBv200耐藥細(xì)胞株的細(xì)胞毒作用，對VCR逆轉(zhuǎn)倍數(shù)分別為56.4和35.9倍，對Dox的逆轉(zhuǎn)倍數(shù)分別為14.98和7.64倍。但這兩種化合物均不能增加敏感

3、株細(xì)胞對抗癌藥物的敏感性，表明這種增敏作用是逆轉(zhuǎn)作用?？蛰d體PEDLLA無逆轉(zhuǎn)MDR活性，說明PEDLLA-FG020326增強(qiáng)的逆轉(zhuǎn)活性不是由于空載體內(nèi)在的細(xì)胞毒性或者化療增敏性引起的。 2．PEDLLA-FG020326和FG020326體內(nèi)逆轉(zhuǎn)MDR的活性比較PEDLLA-FG020326比FG020326具有更好的體外逆轉(zhuǎn)活性，為了研究體內(nèi)PEDLLA-FG020326是否也能夠提高FG020326的藥效動(dòng)力學(xué)，用KBv

4、200細(xì)胞裸鼠移植瘤模型進(jìn)行抑瘤實(shí)驗(yàn)研究。設(shè)生理鹽水對照組，VCR單獨(dú)給藥組(0.2 mg/kg，i.p，q2d)，PEDLLA-FG020326單獨(dú)給藥組(50 mg/kg，i.P，q2d)，F(xiàn)G020326(50 mg/kg，i.p，q2d)+VCR(0.2 mg/kg，i.p，q2d)聯(lián)合用藥組以及PEDLLA-FG020326(50 mg/kg，i.p，q2d)+VCR(0.2 mg/kg，i.p，q2d)聯(lián)合用藥組。結(jié)果顯示單

5、獨(dú)應(yīng)用PEDLLA-FG020326或VCR均不能抑制腫瘤的生長，而VCR與FG020326或PEDLLA-FG020326聯(lián)合用藥組與生理鹽水對照組相比，對腫瘤生長有較明顯的抑制作用，并且PEDLLA-FG020326與VCR聯(lián)合用藥組比FG020326與VCR聯(lián)合用藥組對腫瘤生長的抑制作用更為顯著，抑瘤率分別為50.5﹪和31.2﹪，提示PEDLLA-FG020326和FG020326相比，體內(nèi)也具有更強(qiáng)的逆轉(zhuǎn)活性，并且聯(lián)合用藥組實(shí)

6、驗(yàn)動(dòng)物的體重與對照組相比沒有明顯的下降。 3．FG020326及PEDLLA-FG020326逆轉(zhuǎn)MDR機(jī)理的比較關(guān)于逆轉(zhuǎn)機(jī)理的研究很多。不同的逆轉(zhuǎn)劑，其逆轉(zhuǎn)機(jī)理不同；同一逆轉(zhuǎn)劑則可能擁有多種不同的逆轉(zhuǎn)機(jī)理；同一逆轉(zhuǎn)劑的不同劑量形式其逆轉(zhuǎn)機(jī)理可能也存在量和質(zhì)的差別。體外和體內(nèi)實(shí)驗(yàn)均顯示PEDLLA-FG020326比FG020326具有更強(qiáng)的逆轉(zhuǎn)活性，因此本文也從體外和體內(nèi)兩方面來初步研究其逆轉(zhuǎn)機(jī)理的不同。 體外實(shí)驗(yàn)主要

7、比較腫瘤細(xì)胞中Dox的積累量及泵出量，P-gp功能受抑制的強(qiáng)弱；體內(nèi)主要比較耐藥細(xì)胞裸鼠移植瘤腫瘤組織中阿霉素積累量的差異。 3.1 PEDLLA-FG020326和FG020326對MDR腫瘤細(xì)胞內(nèi)DOX積累及泵出的影響以熒光分光光度計(jì)法測定腫瘤細(xì)胞內(nèi)抗癌藥物Dox的積累量。結(jié)果顯示，KB細(xì)胞內(nèi)Dox的積累量為KBv200細(xì)胞的12倍，提示Dox在KBy200細(xì)胞中的積累量遠(yuǎn)低于其相應(yīng)的敏感株KB細(xì)胞。PEDLLA-FG020

8、326和FG020326呈濃度依賴性地增加KBv200細(xì)胞中Dox的積累量。相同濃度時(shí)，PEDLLA-FG020326比FG020326能顯著增加KBv200細(xì)胞內(nèi)Dox的積累量(P<0.05)。PEDLLA對KBv200細(xì)胞中Dox的積累量無明顯影響。 泵出實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，在相同的時(shí)間點(diǎn)，KBv200細(xì)胞比KB細(xì)胞能釋放更高比例的Dox。在60 min時(shí)有70﹪的Dox從KBy200細(xì)胞中釋放出來，而在KB細(xì)胞中只有40﹪。對K

9、Bv200細(xì)胞而言，PEDLLA-FG020326與FG020326相比，能更有效地抑制Dox的泵出，但兩者對KB細(xì)胞無明顯影響。PEDLLA不影響KBy200及KB細(xì)胞中Dox的泵出。PEDLLA-FG020326、FG020326及PEDLLA對KB細(xì)胞內(nèi)Dox的泵出無明顯影響。 本實(shí)驗(yàn)結(jié)果提示，PEDLLA-FG020326比FG020326能增加耐藥腫瘤細(xì)胞中Dox的積累和延緩耐藥細(xì)胞中Dox的泵出。 3.2 P

10、EDLLA-FG020326和FG020326對P-gp功能的影響羅丹明是P-gp特異性的熒光底物，羅丹明實(shí)驗(yàn)是檢測P-gp功能的經(jīng)典實(shí)驗(yàn)方法。細(xì)胞內(nèi)羅丹明積累量越多提示P-gp功能越弱，反之，P-gp功能越強(qiáng)。本課題采用流式細(xì)胞儀法檢測各處理組腫瘤細(xì)胞內(nèi)羅丹明積累量的變化。結(jié)果表明，耐藥株KBv200細(xì)胞中的羅丹明積累量明顯低于其敏感株KB細(xì)胞。PEDLLA-FG020326和：FG020326呈濃度依賴性地增加KBv200細(xì)胞內(nèi)羅丹

11、明的積累量。相同濃度時(shí)，PEDLLA-FG020326比FG020326能顯著增加KBv200細(xì)胞內(nèi)羅丹明的積累量(P<0.05)。PEDLLA對KBv200細(xì)胞內(nèi)羅丹明的積累無明顯影響。 本實(shí)驗(yàn)結(jié)果提示，PEDLLA-FG020326比FG020326能更好地抑制P-gP的功能，發(fā)揮更好的逆轉(zhuǎn)MDR效果。 3.3 PEDLLA-FG020326和FG020326對裸鼠移植瘤組織中Dox積累的測定選用KBv200和KB細(xì)

12、胞裸鼠移植瘤為模型，用反相高效液相色譜法(reversephase high-performance liquid chromatography，RP-HPLC)測定了敏感株KB細(xì)胞和耐藥株KBv200細(xì)胞腫瘤組織中Dox的積累量，并比較了PEDLLA-FG020326和FG020326對耐藥細(xì)胞腫瘤組織中Dox積累的影響。設(shè)生理鹽水組，Dox(8mg/kg)單獨(dú)用藥組，F(xiàn)G020326(50 mg/kg)和Dox(8 mg/kg)聯(lián)合

13、用藥組，PEDLLA-FG020326(50 mg/kg)和Dox(8 mg/kg)聯(lián)合用藥組及PEDLLA(50mg/kg)和Dox(8 mg/kg)聯(lián)合用藥組。FG020326、PEDLLA-FG020326或PEDLLA于Dox尾靜脈注射前3 h腹腔注射，在預(yù)定的三個(gè)時(shí)間點(diǎn)(Dox尾靜脈注射后第1、3、5h)取腫瘤組織測定。結(jié)果顯示，在相同的時(shí)間點(diǎn)，敏感株KB細(xì)胞對照組腫瘤組織中Dox含量明顯高于耐藥株KBv200細(xì)胞對照組中Do

14、x含量(P<0.05)；耐藥株FG020326或PEDLLA-FG020326處理組腫瘤組織中Dox含量均高于相應(yīng)時(shí)間點(diǎn)的對照組，并且PEDLLA-FG020326處理組腫瘤組織中Dox含量高于FG020326處理組，PEDLLA對耐藥株腫瘤組織中Dox的積累無明顯影響。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果提示，與FG020326相比，PEDLLA-FG020326有可能增加耐藥細(xì)胞腫瘤組織中抗癌藥物的積累。 結(jié)論: 1．PEDLLA-FG020

15、326和FG020326均具有較強(qiáng)的體內(nèi)外逆轉(zhuǎn)MDR的活性，但PEDLLA-FG020326的逆轉(zhuǎn)效果優(yōu)于FG020326。 2．體外實(shí)驗(yàn)中，PEDLLA-FG020326比FG020326具有更強(qiáng)的促進(jìn)耐藥腫瘤細(xì)胞內(nèi)抗癌藥物的積累、延緩抗癌藥物的泵出以及抑制P-gP功能的作用。 3．和FG020326相比，PEDLLA-FG020326可能增加耐藥細(xì)胞腫瘤組織中抗癌藥物的積累。 4．本研究結(jié)果表明，PEDLLA