大鼠眼鏡蛇毒血清抗腫瘤作用的研究.pdf

1、蛇毒屬于較為特殊的中藥，其特點(diǎn)是成分復(fù)雜，主要成分為蛋白質(zhì)，約占干重的90％95％。因此，口服能否吸收，口服制劑是否有抗腫瘤作用以及有效劑量多少為宜，均不得而知。本課題擬采用中藥血清藥理學(xué)實(shí)驗(yàn)方法，研究動(dòng)物眼鏡蛇毒含藥血清的體外抗腫瘤作用。 1、大鼠眼鏡蛇毒血清的制備成年健康SD大鼠，眼鏡蛇毒(najaatravenom，NAV)40mg/kg灌胃，每天3次，連續(xù)灌服5天。于末次給藥后1.5-2h無菌操作下心臟采血，置于離心管中

2、，靜置適當(dāng)時(shí)間，待血塊收縮完全后，3000轉(zhuǎn)/min，離心15分鐘，輕輕吸取上層的血清即為大鼠眼鏡蛇毒血清(NAVSerumofRat，NAVSR)，并將其置-20℃冰箱中保存?zhèn)溆谩?2、NAVSR對(duì)K562細(xì)胞生長的影響采用臺(tái)盼藍(lán)法觀察NAVSR對(duì)人慢性粒細(xì)胞白血病細(xì)胞株K562增殖的影響。結(jié)果發(fā)現(xiàn)NAVSR可抑制K562細(xì)胞的生長，呈劑量依賴性。NAVSR作用48h，對(duì)于K562細(xì)胞的IC50為4.53％。 3、NA

3、VSR對(duì)H22、K562和B16腫瘤細(xì)胞作用的時(shí)效和量效關(guān)系采用臺(tái)盼藍(lán)法分別觀察NAVSR對(duì)H22、K562和B16等腫瘤細(xì)胞增殖的影響。發(fā)現(xiàn)NAVSR可明顯抑制上述細(xì)胞的生長，作用呈劑量依賴性和時(shí)間依賴性。 4、NAV對(duì)小鼠移植性實(shí)體瘤U14和S180的作用 按實(shí)體瘤接種法，取小鼠60只，體重20±2g，雌雄各半，于右腋下接種U14或S180細(xì)胞懸液，每只接種0.2ml(細(xì)胞數(shù)約2×106個(gè)/ml)，次日，小鼠隨機(jī)分四

4、組。它們分別以小鼠NAV灌胃LD50的1/4約4.0mg/kg為高劑量組、2.0mg/kg為中劑量組、1.0mg/kg為低劑量組、生理鹽水組(0.2ml/10g)，2次/日，連續(xù)10天，于末次給藥后1-2h無菌條件采用摘眼球取血法取血，分離血清，此即為荷瘤小鼠眼鏡蛇毒血清(NAVSM)，并完整剝離瘤組織，稱重。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明NAV具有抑制U14，S180移植性實(shí)體瘤的生長，NAV4.0mg/kg、2.0mg/kg和1.0mg/kg對(duì)U14

5、的抑制率分別為94.31％、78.30％、27.05％；對(duì)S180抑制率分別為88.55％、80.12％、70.48％。 5、NAVSM對(duì)人胃癌細(xì)胞株SGC-7901細(xì)胞生長的影響采用SRB法觀察NAVSM對(duì)胃癌細(xì)胞株SGC-7901增殖的抑制作用。結(jié)果表明NAVSM同樣具有抑制SGC-7901細(xì)胞的生長，且隨藥物濃度增加，抑制作用亦增強(qiáng)，其作用24h的IC50為21.52％。 6、采用雙向瓊脂免疫擴(kuò)散方法鑒定大鼠眼鏡蛇