中華眼鏡蛇蛇毒免疫調(diào)節(jié)作用及機(jī)制探討.pdf

1、目的:探究中華眼鏡蛇蛇毒(Naja naja atra venom, NNAV)的免疫調(diào)節(jié)作用及機(jī)制。
　　方法:通過碳粒廓清實(shí)驗(yàn),ELISA檢測(cè)血清補(bǔ)體C3,自然殺傷(Natural killer,NK)細(xì)胞殺傷實(shí)驗(yàn),血清抗綿羊紅細(xì)胞(Sheep red blood cell, SRBC)抗體IgM測(cè)定實(shí)驗(yàn),二硝基氟苯(Dinitrofluorobenzene,DNFB)誘導(dǎo)遲發(fā)型超敏反應(yīng)(delayed-type of hyp

2、ersensitivity, DTH)以及CCK-8法檢測(cè)淋巴細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)檢測(cè)NNAV對(duì)正常小鼠非特異性免疫功能與特異性免疫功能的影響;通過流式分析脾臟T淋巴細(xì)胞亞型,ELISA檢測(cè)血清IgG與IgM含量,對(duì)脾臟切片進(jìn)行H&E染檢測(cè)NNAV對(duì)地塞米松誘導(dǎo)免疫低下小鼠免疫功能的影響;通過CCK-8檢測(cè)細(xì)胞活力,碘化丙啶(Propidium Iodide,PI)染色檢測(cè)T細(xì)胞周期,二醋酸鹽琥珀酰亞胺脂(Carboxy Fluoroscein

3、 Succinimidyl Ester,CFSE)染色檢測(cè)CD4與CD8 T細(xì)胞增殖,ELISA檢測(cè)淋巴細(xì)胞培養(yǎng)上清中IFN-γ、IL-4與IL-17含量,流式分析Th1、Th2與Th17分化對(duì)NNAV免疫調(diào)節(jié)機(jī)制進(jìn)行探究。
　　結(jié)果:在正常機(jī)體,NNAV(20μg/kg)能顯著增加碳粒廓清指數(shù)α;NNAV(20μg/kg、40μg/kg)對(duì)補(bǔ)體C3的生成具有促進(jìn)作用;NNAV(40μg/kg、80μg/kg)對(duì)NK細(xì)胞的殺傷作用

4、呈劑量依賴性增強(qiáng)作用;NNAV(40μg/kg、80μg/kg)促進(jìn)抗SRBC抗體IgM的生成,對(duì)B細(xì)胞的增殖也有促進(jìn)作用,與劑量呈正相關(guān);NNAV(40μg/kg、80μg/kg)顯著抑制遲發(fā)型超敏反應(yīng)造成的耳廓腫脹,對(duì)T細(xì)胞增殖呈劑量依賴性抑制作用。在地塞米松造成的免疫低下機(jī)體,NNAV(80μg/kg)對(duì)CD4與CD8 T細(xì)胞均有抑制作用,且對(duì)CD8 T細(xì)胞的抑制作用強(qiáng)于CD4 T細(xì)胞,使CD4/CD8比例恢復(fù)至正常水平;NNAV

5、(20μg/kg、40μg/kg)對(duì)地塞米松造成的IgG、IgM降低有明顯的逆轉(zhuǎn)作用,對(duì)生發(fā)中心(Germinal Center, GC)的形成也有恢復(fù)作用。機(jī)制研究結(jié)果顯示,在不影響細(xì)胞活力的前提下,NNAV(80μg/kg)可將T細(xì)胞周期阻滯在G0/G1期,對(duì)CD4與CD8 T細(xì)胞增殖均有抑制作用,ELISA結(jié)果顯示NNAV能促進(jìn)IFN-γ與IL-4的生成,抑制IL-17的生成,流式結(jié)果也證實(shí)NNAV對(duì)Th1與Th2的分化有促進(jìn)作用