中華眼鏡蛇蛇毒對急性肺損傷及肺纖維化的保護(hù)作用及其機制.pdf

1、第一部分：NNAV對LPS誘導(dǎo)的小鼠急性肺損傷的保護(hù)作用
　　目的：
　　研究中華眼鏡蛇蛇毒(Naja naja atra venom, NNAV)對脂多糖(Lipopolysaccharide, LPS)所致的小鼠急性肺損傷的保護(hù)作用及其機制。
　　方法：
　　將KM小鼠，雌雄各半，體重18～22g，隨機分為(n=10)生理鹽水對照組、中華眼鏡蛇蛇毒小劑量組（30μg/kg）、中劑量組（90μg/kg）、大劑量

2、組（270μg/kg）。實驗組以灌胃給藥的方式預(yù)給藥四天，分別給予不同劑量蛇毒溶液0.2ml/10 g體重，第五天腹腔注射LPS(5mg/kg，0.1ml/10g)誘導(dǎo)急性肺損傷模型，對照組小鼠給予同體積生理鹽水，6小時后取材稱量肺重，計算肺系數(shù)，檢測血清中TNF-α和IL-1β的含量，Western blot檢測肺組織內(nèi)IκB-α的表達(dá)，免疫組化實驗檢測NF-κB的核轉(zhuǎn)位情況，HE染色觀察肺損傷程度。
　　結(jié)果：
　　急性

3、肺損傷模型小鼠肺系數(shù)和血清中的IL-1β和TNF-α的含量較正常對照組顯著增加（P<0.05或P<0.01），NNAV給藥組肺系數(shù)和血清中IL-1β和TNF-α的含量較模型組顯著減少（P<0.05或P<0.01）。LPS模型組小鼠肺組織水腫明顯，主要病變?yōu)閺浡苑嗡[、炎癥、出血，間質(zhì)增寬伴有大量炎細(xì)胞浸潤，肺泡結(jié)構(gòu)紊亂。NNAV各劑量組小鼠肺泡間隔增寬較模型組明顯減輕，肺泡炎明顯減輕，肺泡結(jié)構(gòu)有明顯改善。NF-κB在肺組織內(nèi)核轉(zhuǎn)位明顯

4、升高，IκB-α含量則明顯下調(diào)，而給予NNAV的組別可以顯著抑制NF-κB核轉(zhuǎn)位并抑制IκB-α的下降。
　　結(jié)論：
　　中華眼鏡蛇蛇毒能夠?qū)怪嗵荓PS誘導(dǎo)的急性肺損傷，其作用機制可能是通過抑制NF-κB的活化,減少細(xì)胞因子、炎癥介質(zhì)（TNF-a、IL-1β）的合成與釋放而起到抗炎作用的。
　　第二部分:NNAV對博萊霉素和LPS誘導(dǎo)的肺纖維化的保護(hù)作用
　　目的：
　　研究NNAV對博來霉素（Bleo

5、mycin，BLM）誘導(dǎo)的肺纖維化模型和反復(fù)給予脂多糖（Lipopolysaccharide, LPS）誘導(dǎo)的肺纖維化小鼠的保護(hù)作用。
　　方法：
　　將雄性KM小鼠90只隨機分為兩批，每批隨機分為(n=9)生理鹽水對照組、中華眼鏡蛇蛇毒小劑量組（30μg/kg）、中劑量組（90μg/kg）、大劑量組（270μg/kg）。實驗組以灌胃給藥的方式預(yù)給藥四天，分別給予不同劑量蛇毒溶液0.2ml/10g體重。第五天建立肺纖維化模型

6、，模型1：第五天向小鼠氣管內(nèi)緩慢注射博萊霉素5mg/kg誘導(dǎo)肺纖維化模型，正常對照組注入等體積的生理鹽水。模型2：第五天除對照組小鼠外，均腹腔注射LPS(5mg/kg，0.1ml/10g)，對照組小鼠給予同體積生理鹽水，之后每周一次腹腔注射LPS反復(fù)誘導(dǎo)肺纖維化模型。治療組NNAV每天灌胃給藥一次，劑量同上，對照組和模型組給予等體積生理鹽水，記錄體重變化，8周后，取材稱取肺重，檢測肺組織羥脯氨酸（HYP）含量，HE染色觀察肺損傷程度。<

7、br>　　結(jié)果：
　　BLM模型組和LPS模型組小鼠體重增加較正常組明顯減少，肺系數(shù)和HYP含量明顯增加（P<0.05或P<0.01），與各自模型組相比，NNAV給藥組小鼠體重增長明顯，肺系數(shù)和HYP含量下降明顯（P<0.05或P<0.01）。與正常組比較，兩模型組小鼠肺泡結(jié)構(gòu)紊亂，肺泡炎明顯，肺泡間隔成纖維細(xì)胞及基質(zhì)大量沉積，呈現(xiàn)典型的肺纖維化病變；與模型組相比，NNAV各劑量組小鼠肺泡間隔增寬較模型組明顯減輕，肺泡炎明顯減輕，

8、肺泡結(jié)構(gòu)有明顯改善，肺纖維化程度明顯減輕。
　　結(jié)論：
　　中華眼鏡蛇蛇毒對博萊霉素誘導(dǎo)的肺纖維化和反復(fù)給予LPS誘導(dǎo)的肺纖維化具有保護(hù)作用，改善機體的病理損傷。
　　第三部分：NNAV對博萊霉素致大鼠肺纖維化的保護(hù)作用及其機制
　　目的：
　　研究NNAV對博來霉素（Bleomycin，BLM）誘導(dǎo)的肺纖維化大鼠的保護(hù)作用及其機制。
　　方法：
　　SD大鼠60只隨機分為5組：正常對照組，模型

9、組，NNAV小劑量組（30μg/kg）、中劑量組（90μg/kg）、大劑量組（270μg/kg），每組12只。實驗組以灌胃給藥的方式預(yù)給藥四天，分別給予不同劑量NNAV（30，90，270μg/kg）0.2ml/100g。第五天向大鼠氣管內(nèi)緩慢注射博萊霉素（5mg/kg）誘導(dǎo)肺纖維化模型，正常對照組注入等體積的生理鹽水。實驗期間每天給藥一次，記錄體重變化，8周后，取材稱取肺重，檢測肺組織中HYP、MDA、SOD和GSH含量；Wester

10、n blot檢測TGF-β1、p-Smad2/3、Smad7、Collagen I的表達(dá)；HE和Masson染色觀察肺損傷及肺纖維化程度；血氣分析判斷機體是否存在酸堿平衡失調(diào)以及缺氧和缺氧程度。
　　結(jié)果：
　　BLM可以誘導(dǎo)MDA、HYP、PCO2、乳酸、IL-1β、TNF-α、TGF-β1、p-Smad2/3和Collagen I表達(dá)的上調(diào)，同時降低SOD、GSH、動脈血中pH值、PO2、SO2和Smad7的表達(dá)，而NN