從中華眼鏡蛇蛇毒中分離純化神經(jīng)生長因子的色譜工藝研究.pdf

1、該研究論文以中華眼鏡蛇蛇毒中神經(jīng)生長因子的分離純化為目的,以廣東產(chǎn)中華眼鏡蛇粗毒為開發(fā)對象,用不同的色譜介質(zhì)聯(lián)用的方法進(jìn)行工藝研究,尋找一種可以簡單、快速、分離效果好且可幾乎線性放大的純化工藝.論文的研究工作為中華眼鏡蛇蛇毒中NGF的工業(yè)化生產(chǎn)以及蛇毒的綜合利用開辟了新的途徑.論文在實(shí)驗(yàn)、研究過程中,采用了6種不同的色譜介質(zhì)進(jìn)行組合,共設(shè)計了5種不同的分離方案對中華眼鏡蛇蛇毒NGF進(jìn)行純化,實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)采用DEAE-Sepharose Fa

2、st Flow陰離子交換層析與Sephadex G50凝膠過濾層析聯(lián)用的兩步色譜法可以從蛇毒中得到純度可達(dá)藥用標(biāo)準(zhǔn)的目標(biāo)產(chǎn)品.此工藝較傳統(tǒng)方法具有分離速度快、工藝簡單、可線性放大的特點(diǎn).色譜條件優(yōu)化實(shí)驗(yàn)確定陰離子的色譜條件為:洗脫流速0.5mL/min,洗脫液A為0.05mol/L PBS,pH8.5,洗脫液B為0.25mol/LNaCl+0.05mol/L PBS,pH8.5,洗脫程序?yàn)榈榷认疵?線性梯度洗脫+等度洗脫的淋洗方式.凝膠

3、過濾層析的色譜條件為:洗脫流速0.9mL/min,洗脫液A為0.05mol/L PBS,pH7.5,洗脫程序?yàn)榈榷认疵?純化后含NGF的蛋白溶液經(jīng)Brodford法測定蛋白質(zhì)的濃度為16ng/mL,回收率為0.49％;以凝膠過濾和反相兩種高效液相色譜法測定其純度,純度都在98%以上,可以達(dá)到藥用標(biāo)準(zhǔn);采用SDS-PAGE電泳法也證明所得的蛋白溶液只有一條蛋白帶,其分子質(zhì)量約為14000;雞胚背根神經(jīng)節(jié)體外培養(yǎng)法證明,純化所得蛋白溶液在濃