中華眼鏡蛇細胞毒素基因克隆、表達及對腫瘤細胞作用機理的研究.pdf

1、中國科學(xué)技術(shù)大學(xué)博士學(xué)位論文中華眼鏡蛇細胞毒素基因克隆、表達及對腫瘤細胞作用機理的研究姓名：陳興勇申請學(xué)位級別：博士專業(yè)：生物化學(xué)與分子生物學(xué)指導(dǎo)教師：徐康森劉兢20090501摘要胞色素C途徑相關(guān)。通過分析K562血液病的形成機制，認為CTXIII可能是通過競爭性結(jié)合ATP，從而阻斷K562細胞中異常酪氨酸激酶活性。3、本論文同時分析了CTXⅡI作用于實體瘤肝癌的應(yīng)用效果，在較低劑量下，CTXⅡI可有效抑制HepG2細胞增殖(24小時

2、的IC50=258pg／m1)，但對Bel1402無明顯作用。進一步研究發(fā)現(xiàn)，DAPI染色、mmexinV／PI雙染實驗和DNA片段分析證明CTXIII促使細胞發(fā)生凋亡，其凋亡過程受死亡受體途徑和線粒體途徑兩種機制調(diào)控。CTXIII的作用早期HepG2細胞周期停滯于S期，半定量PCR和免疫印跡實驗發(fā)現(xiàn)，周期素蛋白CyclinDl、CyclinA和CyclinE在轉(zhuǎn)錄和翻譯過程中，其蛋白和mRNA水平均有所下調(diào)，Bcl2／BaX的蛋白和m

3、RNA比例亦均發(fā)生變化。尾靜脈注射CTXIII引起小鼠快速死亡，LD50為9367士38斗g瓜g。建立體內(nèi)裸鼠HepG2腫瘤模型，經(jīng)口服給藥結(jié)果表明，CTXIII(2mg／l(∥d)可明顯抑制腫瘤生長，其抑瘤率可達394％。病理檢查心、肝、脾、肺、腎及小腸等臟器，未發(fā)現(xiàn)出血或壞死，表明CTXIII經(jīng)口服對動物體基本無毒副作用。綜上所述，CTXIII體內(nèi)、外作用均可有效的抑制腫瘤細胞(K562、H印G2)的增殖，真核酵母表達產(chǎn)生的重組細胞