幾種霉菌毒素對BHK細(xì)胞毒害影響及作用機(jī)理的研究.pdf

1、本文以敘利亞倉鼠腎細(xì)胞（BHK-cell）為實驗?zāi)Ｐ?，分別研究了赭曲霉毒素A、黃曲霉毒素B1和鐮刀菌屬三大類六種霉菌毒素對BHK細(xì)胞活力、DNA完整性、細(xì)胞SOD活性和MDA含量的影響，初步探討霉菌毒素對BHK細(xì)胞產(chǎn)生影響的劑量和時效關(guān)系，及其可能的作用機(jī)理，為科學(xué)防控霉菌毒素污染提供參考依據(jù)。
　　 試驗中，用噻唑蘭法檢測赭曲霉毒素A(OchratoxinA,OTA)，黃曲霉毒素B1(AflatoxinB1,AFB1)，鐮刀菌

2、屬產(chǎn)生的玉米赤霉烯酮(Zearalenone,ZEA)、脫氧雪腐鐮刀菌醇（或嘔吐毒素）（Deoxynivalenol,DON）、煙曲霉毒素（Fumonisin，F(xiàn)u）、T-2毒素對細(xì)胞活力的影響，用單細(xì)胞凝膠電泳法和DNA Ladder條帶法檢測這六種毒素對細(xì)胞DNA的損傷，用黃嘌呤氧化酶法檢測細(xì)胞中SOD活性的變化，用硫代巴比妥酸法測定細(xì)胞培養(yǎng)液中MDA的含量。
　　 赭曲霉毒素A對BHK細(xì)胞毒性及作用機(jī)制的研究中表明，赭曲霉

3、毒素A對BHK細(xì)胞活力的影響呈現(xiàn)時間和劑量依賴性的抑制作用。染毒12 h后，2.5、5、10、20和40μg.mL-1OTA劑量組BHK細(xì)胞的活力均明顯降低(P<0.05)，至染毒24 h，40μg.mL-1OTA染毒劑量組細(xì)胞活力下降達(dá)90％。OTA對BHK細(xì)胞DNA的損傷作用同樣存在明顯的劑量效應(yīng)關(guān)系，與對照組相比,除2.5 μg.mL-1劑量組外,其余各劑量組的彗尾DNA含量和拖尾率差異極顯著(P<0.01)，40μg.mL-1劑

4、量組的細(xì)胞拖尾率高達(dá)對照組的80倍。40mg.mL-1OTA處理 BHK細(xì)胞24 h后檢測到特征性的凋亡梯形條帶，對照組則未檢測到。OTA作用于BHK細(xì)胞24 h后，各劑量組細(xì)胞內(nèi)SOD活性顯著降低(P<0.05)，最高劑量組（40mg.mL-1）細(xì)胞內(nèi)SOD活性降低至對照組的四分之一;細(xì)胞培養(yǎng)液中MDA含量則極顯著升高（P<0.05），最高劑量組（40mg.mL-1）細(xì)胞培養(yǎng)液中MDA含量與對照組相比增高了500％。
　　 黃

5、曲霉毒素B1對BHK細(xì)胞的毒性及作用機(jī)制的研究中AFB1作用于BHK細(xì)胞24 h后，2.5、5、10、20和40mg.mL-1黃曲霉毒素B1劑量組BHK細(xì)胞的活力均明顯降低(P<0.05)， 40mg.mL-1AFB1染毒劑量組細(xì)胞活力下降達(dá)70％。AFB1對細(xì)胞DNA的損傷作用同樣存在明顯的劑量效應(yīng)關(guān)系，與對照組相比,除2.5 mg.mL-1劑量組外,其余各劑量組的細(xì)胞受損率和拖尾率差異極顯著(P<0.01)，40mg.mL-1劑量組

6、的細(xì)胞拖尾率達(dá)對照組的70多倍。AFB1染毒組細(xì)胞內(nèi)SOD活性顯著降低(P<0.05)，24 h后40μg.mL-1劑量組的SOD活性低于對照組的二分之一；細(xì)胞培養(yǎng)液中MDA含量則極顯著升高（P<0.01），最高劑量組（40μg.mL-1）細(xì)胞液中的MDA含量與對照組相比均升高了近700％。實驗中40mg.mL-1劑量組，在24 h檢測到最為清晰的DNA Ladder條帶。
　　 鐮刀菌屬的霉菌毒素主要包括玉米赤霉烯酮、脫氧雪腐

7、鐮刀菌醇、煙曲霉毒素、T-2毒素。鐮刀菌屬的霉菌毒素對BHK細(xì)胞毒性及作用機(jī)制的研究中表明：四種鐮刀菌霉菌屬毒素均可引起B(yǎng)HK細(xì)胞活力顯著降低(P<0.05)，至染毒后24 h，40mg.mL-1ZEA高劑量組細(xì)胞活力下降達(dá)95％。四種霉菌毒素對BHK細(xì)胞DNA的損傷作用也非常明顯，如40mg.mL-1Fu劑量組DNA拖尾率高達(dá)對照組的80多倍，差異極顯著(P<0.01)。在毒素作用于BHK細(xì)胞24 h后，ZEA、DON、Fu的40mg

8、.mL-1劑量組和T-2的1mg.mL-1劑量組均檢測到DNA Ladder條帶，24 h后最為明顯，對照組均未檢測到。ZEA、DON、Fu、T-2均可使BHK細(xì)胞內(nèi)SOD活性顯著降低(P<0.05)，如DON作用于細(xì)胞24 h后，最高劑量組（40mg.mL-1）細(xì)胞內(nèi)SOD活性降低至對照組的五分之一。ZEA、DON、Fu、T-2作用于BHK細(xì)胞后，細(xì)胞培養(yǎng)液中MDA含量則極顯著升高（P<0.05），如T-2毒素1mg.mL-1劑量組細(xì)