天然抗氧化劑對節(jié)球藻毒素誘導的魚體免疫細胞毒效應的保護作用及機理研究.pdf

1、節(jié)球藻毒素是泡沫節(jié)球藻的次級代謝產物，廣泛分布于藍藻水華爆發(fā)水域，能損害魚類免疫系統(tǒng)，影響魚類正常的生理機能，對魚類生存造成危害。本研究選用藻食性鯉科鯽魚(Carassius auratus)為材料，采用離體細胞培養(yǎng)體外誘導方法，通過流式細胞儀凋亡率測定、共聚焦激光顯微鏡和透射電鏡細胞結構觀察、瓊脂糖凝膠電泳DNA-Ladder檢測技術研究節(jié)球藻毒素對魚體免疫細胞的毒效應。在此基礎上，深入研究了節(jié)球藻毒素對鯽魚淋巴細胞毒性的分子機理。<

2、br>　　 共聚焦激光顯微鏡實驗結果表明，空白組細胞核質呈現出均勻的熒光，節(jié)球藻毒素誘導組的細胞則表現為顆粒狀熒光碎片.透射電鏡實驗結果展示了節(jié)球藻毒素暴露后的鯽魚淋巴細胞呈現的典型細胞凋亡形態(tài)學特征，處理組細胞漿內空泡增多，細胞胞質濃縮，胞核染色質發(fā)生凝集等現象，對照組細胞則表現為細胞形態(tài)規(guī)則，核染色質分布均勻.瓊脂糖凝膠電泳實驗和流式細胞儀檢測結果均顯示，節(jié)球藻毒素可誘導細胞DNA片段化，分別出現典型的細胞凋亡特征DNA-Ladd

3、er和亞二倍體峰;1、5、10、100μg/L節(jié)球藻毒素處理12h后，淋巴細胞凋亡率分別達到15.76％、17.36％、20.34％、44.21％，而對照組的僅為2.4％.結果表明，節(jié)球藻毒素可以誘導鯽魚淋巴細胞發(fā)生凋亡.
　　 研究還發(fā)現，節(jié)球藻毒素可以提高細胞內ROS水平，降低線粒體膜電位，上調細胞內鈣離子濃度，下調Bcl-2基因mRNA表達量，上調Bax的基因mRNA表達量，降低Bcl-2蛋白表達量，上調Bax蛋白表達量，

4、激活Caspase3和Caspase9活性，Caspase8表達則無差異.可見，節(jié)球藻毒素誘導鯽魚淋巴細胞發(fā)生凋亡主要表現為線粒體通路，進而可能影響魚類免疫系統(tǒng)。
　　 天然抗氧化劑表沒食子兒茶素沒食子酸酯(EGCG)是一類天然抗氧化劑，具有清除氧自由基、抑制細胞凋亡、增強細胞免疫力等功能。節(jié)球藻毒素可以誘導細胞發(fā)生氧化應激，產生細胞毒性，本研究從抗氧化系統(tǒng)和細胞凋亡兩方面研究了10、100、1000μg/L EGCG對100μ

5、g/L節(jié)球藻毒素誘導組鯽魚淋巴細胞的調節(jié)作用，探討其對節(jié)球藻毒素誘導魚類細胞毒性的解毒作用機理。
　　 實驗結果表明，EGCG可以降低節(jié)球藻毒素誘導的魚體免疫細胞氧化損傷，提高胞內SOD和CAT酶活性，增加胞內GSH含量，降低胞內ROS水平，減少細胞脂質過氧化損傷.流式結果表明，10、100、1000μg/L EGCG添加處理12h后，細胞凋亡率分別降低為27.9％、19.1％、13.7％，而100μg/L節(jié)球藻毒素誘導組的細胞