抗T-2毒素單鏈抗體的制備及該毒素對(duì)細(xì)胞毒性影響的初步研究.pdf_第1頁(yè)
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1、T-2毒素是由多種真菌產(chǎn)生的單端孢霉烯族(trichothecenes,TS)毒素中最毒的毒素之一。該毒素在自然界中分布極為廣泛,是危險(xiǎn)的食品污染物,對(duì)人畜健康危害十分嚴(yán)重。為此,在本研究中,我們構(gòu)建了抗T-2毒素的噬菌體單鏈抗體庫(kù),從中篩選親和力較高的單鏈抗體,從而為T-2毒素的檢測(cè)奠定基礎(chǔ)。此外,并對(duì)其引起的細(xì)胞毒性進(jìn)行了研究。
　　 根據(jù)T-2毒素是小分子半抗原的特性,我們首先將T-2毒素與牛血清白蛋白BSA通過琥珀酸酐法

2、進(jìn)行交聯(lián)使之變成完全抗原。然后用交聯(lián)物T-2HS-BSA免疫Balb/c雌性小鼠。達(dá)到一定的效價(jià)后,從小鼠的脾臟中提取總RNA,反轉(zhuǎn)錄得到cDNA第一鏈,通過PCR擴(kuò)增得到重鏈和輕鏈可變區(qū)VH、VL基因,通過重疊延伸PCR(SOE-PCR)組裝成scFV并克隆到噬菌體載體pCANTAB5E中,構(gòu)建噬菌體抗體庫(kù)。通過噬菌體展示技術(shù)經(jīng)過四輪淘選得到一株有親和力的單鏈抗體T1。
　　 為研究T-2毒素對(duì)骨髓瘤細(xì)胞SP2/0的毒性,我們

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