抗河豚毒素抗體的制備及鑒定.pdf

1、河豚毒素（Tetrodotoxin，TTX）是一種小分子量海洋神經(jīng)毒素，主要存在于河豚魚體內(nèi)，特別是在卵巢和肝臟中。雖然河豚魚味道鮮美，但是 TTX是毒性極強(qiáng)，它能夠與細(xì)胞膜表面的Na+通道受體結(jié)合，阻礙神經(jīng)和肌肉的傳導(dǎo)，從而導(dǎo)致神經(jīng)麻痹、呼吸衰竭，甚至引起死亡。在國(guó)內(nèi)外的沿海地區(qū)，由于食用河豚魚而引起中毒的事例也頻繁發(fā)生，因此對(duì)TTX的定量分析的研究非常重要。目前，對(duì)TTX檢測(cè)的傳統(tǒng)方法和各種儀器分析法，由于檢測(cè)時(shí)間長(zhǎng)、靈敏度差或是樣

2、品處理復(fù)雜、成本高等原因，而限制了它們的應(yīng)用和推廣。
　　本研究以建立一種快速有效的檢測(cè)方法為目的，制備高親和力、高特異性的TTX單克隆抗體。本實(shí)驗(yàn)以鑰孔戚血藍(lán)素（KLH）、牛血清白蛋白（BSA）與TTX的偶聯(lián)產(chǎn)物分別作為制備抗體的免疫抗原和檢測(cè)抗原。通過(guò)動(dòng)物免疫，獲得高效價(jià)的TTX抗血清，最敏感的小鼠效價(jià)達(dá)到1:32000。通過(guò)優(yōu)化基于TTX多克隆抗體建立的間接競(jìng)爭(zhēng)ELISA方法的條件，確定ELISA最佳工作條件為:包被原TTX

3、-BSA最佳工作濃度為0.25μg/ mL；抗血清最佳稀釋度為1:32000；酶標(biāo)二抗（HRP-IgG）的最佳稀釋度1:10000。以優(yōu)化條件建立ELISA標(biāo)準(zhǔn)曲線的檢測(cè)線性范圍為83~1906 ng/mL，最低檢出限為82.15 ng/mL。批間和批內(nèi)變異系數(shù)均小于9%，樣品回收率為83.034%~100.296%。
　　通過(guò)細(xì)胞融合與首創(chuàng)的快速篩選方法，大大縮短細(xì)胞克隆化時(shí)間，獲得5株穩(wěn)定分泌的單克隆細(xì)胞株，分別命名為1D3、